[討論] TCA蛋白質沉澱

看板Biotech作者 (用力活著)時間16年前 (2009/06/11 21:50), 編輯推噓4(4推 0噓 4→)
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想請問一下關於TCA沉澱蛋白質的方法~ 先說我的處理方式: 1.將蛋白萃取液加入含有10% TCA的丙酮溶液中 2.將混合液放入-20度 overnight 3.隔天取出離心30分鐘(10000 xg)，倒掉上清液 4.取出pellet置入tube中並加入丙酮1mL，並離心10分鐘 5.倒除上清的丙酮，再加入丙酮離心(repeat數次) 6.加入先前的萃取buffer去溶沉澱 現在發現pellet無法溶解在buffer之中~@@ 我知道做二維的時候會加rehydration buffer去溶pellet 但是我現在是要跑一維，那該怎麼做呢? 是我的操作方法有錯嗎? 煩請知道的人解答一下~ 謝謝~! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.88.68
推
06/11 22:33, , 1F
沒有錯，TCA/acetone本來就超級難溶，我後來多加urea和DTT
06/11 22:33, 1F
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06/11 22:33, , 2F
也沒用，就是一團在那裡
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06/11 22:35, , 3F
後來放棄，只用acetone沈澱，不知其他人有無新方法
06/11 22:35, 3F
推
06/11 23:26, , 4F
我有另外再加thiourea ~ 還有pellet都沒辦法溶的話我認為雜
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06/11 23:27, , 5F
質可能性很高~我都會重抽
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推
06/12 00:19, , 6F
煮了還是不溶嘛？用rehydration buffer也是可以跑1D啊
06/12 00:19, 6F
推
06/13 02:11, , 7F
我沉澱有時會包含DTT-數次丙酮-95%絕對酒精兩次後乾燥
06/13 02:11, 7F
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06/13 02:12, , 8F
好像過程有DTT效果都不錯 我是以CHAPS/urea/thiourea溶
06/13 02:12, 8F
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