[求救] 關於破菌與蛋白質純化

看板Biotech作者 (sp3)時間16年前 (2009/06/10 23:50), 編輯推噓4(405)
留言9則, 5人參與, 最新討論串1/1
請問各位實驗魔人大大兩個問題 第一個是以lysis buffer破菌的話 怎麼知道它有破完全呢? 是不是看有沒有DNA RNA流出後所造成的黏稠現象來判斷? 還是有別的判斷方法? 第二個問題是 如果目標蛋白質不行被很濃的硫酸銨沉澱下來 那麼該怎麼辦呢? 這樣是不是代表蛋白質親水性太高 那要換成什麼純化方法比較好呀? 麻煩請高人指點 ^^" 感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.217.50 ※ 編輯: sp3 來自: 140.112.217.50 (06/10 23:52)

06/10 23:57, , 1F
推薦使用french press破菌 重複數次破菌後 濃稠度會逐漸降低
06/10 23:57, 1F

06/10 23:59, , 2F
我使用此法獲得很好的破菌效果 (相較於sonication)
06/10 23:59, 2F

06/11 10:14, , 3F
菌破掉溶液會比較澄清吧
06/11 10:14, 3F

06/11 11:09, , 4F
我都是用sonication,破菌前後,顏色有明顯的變化!
06/11 11:09, 4F

06/11 11:11, , 5F
有接taq嗎? 若硫酸銨有將大部份的雜蛋白沉澱下來
06/11 11:11, 5F

06/11 11:12, , 6F
接下來,可考慮HPLC純化。
06/11 11:12, 6F

06/11 14:45, , 7F
恩 有加tag 謝謝樓上幾位大大>//////<
06/11 14:45, 7F

06/11 22:26, , 8F
1.拿一點菌液到顯微鏡下看 2.可試不同沈澱劑,有陽離子型
06/11 22:26, 8F

06/11 22:28, , 9F
或陰離子型,google一下"膠羽"可能有幫助
06/11 22:28, 9F
文章代碼(AID): #1ABzP9uM (Biotech)