[求救] 關於養菌,抽Mini (>_<) 急~

看板Biotech作者 (Matt)時間16年前 (2009/06/02 15:28), 編輯推噓10(10推 0噓 17→)
留言27則, 11人參與, 7年前最新討論串1/1
我手殘,將兩種construct的Mini混合了 因為要用酵素切Overnight,確認insert是否有接進去 進度不想再延後一天,於是又重新養菌 想請問一下,通常養菌抽Mini都是12~16小時 我現在三點加了7CC的LB (實驗室都加這麼多),37度搖 希望今晚就能夠再做Mini,好讓我再加酵素切Overnight 不知道今晚9點左右,是否就可以抽了呢? 想請問一下,抽Mini養菌的最短紀錄是如何? 是否有人有此經驗呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.93.47
推
06/02 15:58, , 1F
酵素切OVERNIGHT是為什麼？ 覺得六小時好像有點少
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倒不如酵素不要切OVERNIGHT 早上抽完丟下去下午還是可以
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看結果
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推
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check用的1h就夠了
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06/02 16:09, , 5F
因為我把兩種mini混合了.. (汗)
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切這麼久,是其中一種要用來做Vectro,想切乾淨一點
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推
06/02 16:17, , 7F
重新transform重養吧....不然後面出錯天知道是哪邊
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推
06/02 16:37, , 8F
挑colony養6小時時間有點少，再加上你養7c.c.如果溶氧量不足
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06/02 16:39, , 9F
長得會很慢....我曾經做過3c.c.養7~8個小時，全部都拿去抽
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3c.c.的菌數感覺很多，不過抽出來的質體量卻很少...0rz
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建議你養到隔天再抽拉，vector想切乾淨，那就多加點酵素好了
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即便製備vector，應該也不需要切隔夜，4hr很足了我覺得
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推
06/02 17:28, , 13F
用2YT可以養八小時就好
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推
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您為什麼要這麼著急呢~ (嘿嘿)
06/02 18:33, 14F
推
06/02 19:36, , 15F
慢慢來 比較快 一步錯 步步錯
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推
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第一行+第三行 => 你為什麼這麼著急呢?
06/02 21:27, 16F
推
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重頭做最穩 不然這東西你也不確定純不純 做到最後發現
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06/03 08:19, , 18F
都錯了才從頭的話 不是更浪費時間嗎?
06/03 08:19, 18F
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我昨天兩個都做了(一起進行),養6小時可以離到菌,但mini抽
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了後,mini很少. 感謝你們的建議
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06/03 20:03, , 21F
OS:辛苦沒關係,實驗狂做沒關係,但沒有結果真的很讓人懊惱
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06/03 20:05, , 22F
ligation失敗,不知是技術還是經驗問題.我想幸運問題吧(嘆)
06/03 20:05, 22F
推
06/05 10:57, , 23F
mini抽得低，ligation的效率相對也較低，跟幸運無關啦!
06/05 10:57, 23F
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06/05 10:59, , 24F
重新養7ml隔夜菌液抽mini就好，酵素切3hr就可做Vector了
06/05 10:59, 24F
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Boss說菌量太濃的話，菌會把plasmid吐掉，Y大可能是這樣
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11/11 01:30, , 26F
重頭做最穩 不然這東西 https://muxiv.com
11/11 01:30, 26F
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01/03 16:55, 7年前 , 27F
重頭做最穩 不然這東西 https://daxiv.com
01/03 16:55, 27F
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