[求救] 抽完RNA之後的電泳圖很扯

看板Biotech作者raxjimmy (rearrangement)時間15年前 (2009/05/10 22:30)推噓6(6推 0噓 14→)

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1%agarose電泳 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=raxjimmy&b=13&f=1728006415&p=0 我用TAE buffer 100V 15min (參考版友) box我有用很毒的DEPC水(未滅菌)混酒精75%先處理過 TAE是用之前配的50X稀釋只是這樣好像不算現配就是了 lane1 lamda phage 用HindIII處理 lane3&4 沒有用玻璃珠直接磨 lane5&6 加入玻璃珠磨最後沉澱的量都差不多都用20ul回溶不過有兩個問題第一個是ISP沉澱物看起來不夠透明白白的而且回溶也出現一點問題不完全溶而會留下一些纖維絲狀物第二個問題是我加了ISP之後因為對於不vortex的步驟突然產生疑惑於是就給他粗魯的攪動了...... 不過攪動之前我看ISP和trizol抽出的粉紅上清中間出現沉澱這樣就是正常嗎? 還是其實一開始應該讓ISP跟trizol均質? 最後這樣的結果是我取10ul跑的才這樣的亮度= =||| 260/280很糟出現小於1就算了還有0.1的其實過程中發現很多步驟很不好處理的比如說我用mortar處理完的sample一拿離開mortar 就會吸水氣變的很黏很難弄到eppendorf 最後回溶之後我才開始做aga膠所以在冰上放了一下才跑電泳不過如果中間步驟和器材都沒有污染的話那這個圖是什麼意思全滅了嗎= = 也沒拖尾濃度低分子量又小跑的比bromophenol blue還快也太瞎了吧所以是中間有污染摟? 第一次做沒有一個部分跟我預期的一樣XD 真是一頭霧水我用剩下的sample裝在50ml的離心試管然後丟到液態氮桶明天應該會再拿出來做一次暫時只能想到步驟重複然後ISP那裡不要搖晃就照著protocol放10min然後離心然後跑電泳測UV之後再比較不過UV那個應該很明顯我抽失敗吧... 額外一問配3%雙氧水可以買藥房的來稀釋嗎經費問題而且老闆對雙氧水實在不怎麼感興趣所以我想自己去買一瓶配畢竟是我在吸嘛XD -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.13.115.38

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bluecsky

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