[討論] 植物組織的total RNA isolation
首先感謝各位大大在前面的提問中給了我很多清晰的想法
看熟protocol之後再爬完所有跟RNA有關的文章
原本要請別的實驗室的學姊帶一次的
不過今天去找學姊 學姊回家過媽媽節了QQ
我打算稱明天老闆不再的時候自己先玩兩把
但是怕有什麼遺漏 所以想跟大家討論我初步的protocol
我們的酵素是水解代謝的酵素 所以我打算去隔壁農場借一株比較嫩的芋頭
挖起來然後拎回實驗室後 先取一兩片嫩葉 再挖一兩塊芋頭和莖交接處的肉
我有兩套mortar 所以可以一起處理
1. 把組織約1-2g先用滅菌過的剪刀和刀片初步破碎 然後再放置到液態氮的mortar中
加入bead磨碎
2. 等液態氮揮發到快乾之後取約100m放入1.5ml eppendorf,加入1ml trizol,vortex 3min
加入200ul chloroform, vortex 1min, 4度離心 14000rpm 15min
3. 取上清液換新tube(不抽到接近分層),加入500ul ISP,靜置 10min,14000rpm 10min
4. 倒上清液,75%EtOH 1ml wash pellet,14000rpm 10min
5. 倒上清液,靜置陰乾(看他多久才會快乾)
6. 用20ul RNase free water回溶
實驗結果判別
1. 取5ul + 495ul RNase free water 測260/280
2. 取5ul跑電泳(1%agarose,TAE-fresh prepared,100V 15min)
以上....
不知道有沒有什麼遺漏或錯誤的步驟
還有vortex和不需vortex的步驟應該沒有搞錯吧
有錯誤的地方修改一下明天就拿這套protocol衝了~~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.13.115.38
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