[討論]ligation問題?

看板Biotech作者 (chi)時間16年前 (2009/05/07 22:45), 編輯推噓2(203)
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最近要把我的insert(約2.9kb)接入expression vector(PMal-C2X,6.6kb)中 ,結果在transform之後有長出數十顆single colony,把這接single colony進行 培養並抽plasmid,之後進行double digest,發現有一組切出insert大小很相近,送 定序,定序出來結果進行比對,結果發現比對不到我的insert序列卻比對出cloning host的序列,想請問是操作過程中有汙染造成的或是有其他原因?希望好心人士給點建議 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.121.155.210

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先確認EXPRESSION VECTOR上除了cloning site外有沒有會被RE
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辨識的site
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我猜你是用vector上的primer讀,如果是汙染insert有進去的話
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應該會有兩個訊號
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所以應該是沒clone成功
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文章代碼(AID): #1A0lGX_d (Biotech)