[求救] Western Blot 的疑問....

看板Biotech作者 (nausea)時間16年前 (2009/05/06 22:51), 編輯推噓4(4推 0噓 12→)
留言16則, 6人參與, 7年前最新討論串1/1
請參考圖片 http://www.wretch.cc/album/album.php?id=kattekeneden&book=1 三張照片是同一片menbrane 染不同抗體得到的結果 每一張右邊sample-1.2.3 各和 左邊sample-1.2.3 為同Sample 為什麼會出現在不同抗體有的band會出現不完整 圖1-1 右2和左2 跑出結果不同 圖2-1 右3和左3 結果不同 （明明都是同一管Sample Q_Q） 但 圖4-1 看起來就沒有band 不均勻的問題!! 這種狀況的原因有可能是 1. 做膠的問題 2. protein extract 的問題 3. 跑膠的問題 4. 還是其他方面呢? 麻煩 Western 達人能夠幫忙>"< 感激不盡.... Ps. load sample時，沒有pipeting 只有用手指彈彈eppendorf 這樣會造成 上面的問題嗎？ 謝謝... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.161.214.145
推
05/07 14:49, , 1F
你轉膜前有用transfer buffer先泡膠嗎??
05/07 14:49, 1F
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05/07 23:39, , 2F
我也是邊邊band不完整耶 學長是說邊邊不要load sample
05/07 23:39, 2F
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05/07 23:40, , 3F
樓上 為啥要用transfer buffer先泡膠?
05/07 23:40, 3F
推
05/08 00:01, , 4F
似乎可以防止小分子轉過頭 PVDF泡一下甲醇也不錯
05/08 00:01, 4F
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05/08 11:05, , 5F
membrane 有先泡過5-10分鐘...
05/08 11:05, 5F
推
05/08 11:56, , 6F
有時候sample太濃轉膜的時候solvent未必可以均勻滲透膠的
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05/08 11:57, , 7F
band 所以才會出現有跑的不均勻的斷層 這種現象在跑比稀
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05/08 11:58, , 8F
的sample中就比較沒看過 所以這只是我的推測XD
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05/08 11:59, , 9F
當然也有可能是membrane的問題
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05/08 12:00, , 10F
PVDF我第一次做沒泡甲醇 完全失敗..囧 被老闆痛罵
05/08 12:00, 10F
推
05/08 16:56, , 11F
其實我傾向 呈色的問題，因為比較分子量在 40-50 kDa 間
05/08 16:56, 11F
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05/08 16:57, , 12F
結果不太一樣 所以 Transfer 可能沒問題
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05/08 16:57, , 13F
建議以後加多一點呈色染劑 (ECL或其他)並且注意分佈均勻
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11/11 01:27, , 14F
當然也有可能是memb https://noxiv.com
11/11 01:27, 14F
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01/03 16:54, 7年前 , 15F
m
01/03 16:54, 15F
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01/03 16:54, 7年前 , 16F
embrane 有先 https://noxiv.com
01/03 16:54, 16F
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