[求救] real-time PCR NTC有反應??

看板Biotech作者 (123)時間16年前 (2009/04/27 12:50), 編輯推噓2(2推 0噓 0→)
留言2則, 1人參與, 最新討論串1/1
最近剛開始做real time PCR實驗(使用ABI.SYBR) 一開始抓primer濃度的時候,發現會NTC也會有反應 也就是dissociation curve中NTC的peak跟有template在相同的位置 本來是想說應該是污染問題 但是 換了水,重訂primer,重分裝之後,也沒有改善 (分裝的過程有戴手套跟口罩,tips也是開新的,手也沒有在tube上揮來揮去) 另做另一組==>原本的NTC再去除primer,就很乾淨 有想過是否要再做一組==>SYBR mixture+primer 或者是primer要重設計? 謝謝!! 另附其他資訊 primer F:ATCTCCTGCGAGAGCAAAGC primer R:TGCATCTGGATGGAGCTGAA total reaction volume=20uL,使用的是八連排的tube -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.130.37 ※ 編輯: snkre 來自: 140.112.130.37 (04/27 12:51) ※ 編輯: snkre 來自: 140.112.130.37 (04/27 13:46)
推
04/27 14:53, , 1F
應該是因為template的污染 尤其是pcr or plasmid prep
04/27 14:53, 1F
推
04/27 14:56, , 2F
建議用laminar flow hood 或是到沒有做pcr的bench那邊做
04/27 14:56, 2F
‣ 更多 snkre 的文章
文章代碼(AID): #19zJc3rc (Biotech)