[求救] 請問比較不同誘導時間蛋白質表現量的方法
大家好
最近我在生產異源蛋白質
用 flask 培養
想要比較不同誘導時間蛋白質產量的高低
去找出最適合的誘導時間來得到最高產量的蛋白質
目前用的方式是
跑 SDS-PAGE 以及 Western Blot
實驗的方法是每 24 h 取樣一次
將菌體離下後取上清液裝在eppendorf
然後取一些 sample 加適量的 dye 之後 100度C 10 min 將蛋白denature
冷卻後冰 -20度C 儲存
等 sample 數足夠之後一起跑 SDS-PAGE
這樣的做法是為了讓不同誘導時間的 sample 跑在同一片 PAGE 上
方便我比較 band 的粗細 來大約看一下產量多寡
但是冰久了 or 因為反覆拿出的關係
protein 似乎因為降解造成我同一個 sample 在不同一片 PAGE上的量不一樣
冰越久的似乎降解越嚴重 然後 band 都糊糊的 有 smear 的感覺
所以想請問大家
有沒有比較好的解決方法?
或者是其他快速的測定方法
謝謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.74.19
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