[討論] ligation check?

看板Biotech作者 (cc)時間16年前 (2009/04/15 01:26), 編輯推噓7(7推 0噓 6→)
留言13則, 7人參與, 7年前最新討論串1/1
利用PCR方式來確認insert是否有接入vector中(抽完plasmid再做PCR),發現沒有P出 預期片段,只有與空plasmid的結果一樣,但用RE切卻有接近insert大小的band.是否與 primer專一性有關還是insert根本未接入?primer是用當初P出insert的primer -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.135.98.104
推
04/15 12:36, , 1F
看看你的vector有沒有primer，可以用它PCR看看
04/15 12:36, 1F
→
04/15 12:37, , 2F
如果你的primer專一性很好，很好P...那我覺得大概沒接入吧
04/15 12:37, 2F
推
04/15 12:38, , 3F
用 RE 切 insert 看是否能切出預期的片段
04/15 12:38, 3F
推
04/15 12:39, , 4F
insert多大？ 如果只切一刀比較空vector和有insert的size
04/15 12:39, 4F
推
04/15 12:43, , 5F
找 1-2 個 RE 切 vector 及 insert 各一刀確認預期片段
04/15 12:43, 5F
推
04/16 00:01, , 6F
用insert DNA上的一支primer及vector上的primer互P看看..
04/16 00:01, 6F
→
04/16 00:04, , 7F
另外, colony PCR就可以check了, 不用到抽完plasmid
04/16 00:04, 7F
推
04/16 13:46, , 8F
我有這種情形過 可能是plasmid supercoil的問題
04/16 13:46, 8F
→
04/16 13:47, , 9F
可把PASMID切一刀後在去PCR SCREENING
04/16 13:47, 9F
推
04/16 22:14, , 10F
PCR有做postive control嗎?(看你原本用什麼template來P的
04/16 22:14, 10F
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04/16 22:14, , 11F
如果切RE沒有錯誤的話,我會比較相信RE結果~
04/16 22:14, 11F
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11/11 01:24, , 12F
PCR有做postiv https://muxiv.com
11/11 01:24, 12F
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01/03 16:53, 7年前 , 13F
我有這種情形過 可能 https://noxiv.com
01/03 16:53, 13F
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