[閒聊] 各種程度的低溫,對sample保存的有何差異?

看板Biotech作者 (墮天使)時間15年前 (2009/04/12 23:43), 編輯推噓4(405)
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我目前只知道低溫對protein的degradation有很好的抑制效果,但也聽過結冰是另一種 造成denature的原因,因為冰晶有氫鍵的問題。 不過也有人說冰晶是在緩慢冷卻卻過程中才會產生的,如果直接丟液態氮就可以避免。 我想請教的問題有兩個: 1.像是enzyme或是antibody這種要二三四級結構的protein,丟液態氮的保存, 和加抗凍劑放-20度或-80度,哪種會比較適合? 2.像是要跑SDS-PAGE這種最後一定會denature的,是否就不用考慮氫鍵問題? 也就是說cell lysis後,不管有沒有離心或加入sample buffer,就算來回解凍也 無所謂?只要越低溫越好? -- 太初有道,道與耶和華同在,道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。 萬物乃藉祂所造,凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭, 這生命就是人的光。光照在黑暗裡,黑暗卻不接受光。 吾輩乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦誘惑,回歸黑暗。 我不斷地徘徊於光明與黑暗之間,從被造之日至今,又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.22.47

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1.蛋白放-80還是會有保存期限的問題,抗體通常放-20不需液態
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04/13 10:36, , 2F
氮預先處理,(指在cocktail情形下) 2.蛋白重複解凍會造成band
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04/13 10:37, , 3F
模糊不夠sharp...最好是分批保存,一次用一批
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放長期情形下也是-80優於-20度保存...
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04/13 13:43, , 5F
請問為什麼重複解凍會模糊呢?
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04/13 14:53, , 6F
我自己有跑出這種結果,推測可能是造成degrade...
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04/14 08:54, , 7F
如果是跑PAGE的 為什麼不直接加sample buffer就好??
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04/14 08:55, , 8F
不管什麼protein 保存中都會慢慢的degrade
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04/27 22:47, , 9F
那如果是要有二級以上結構的保存呢?直接丟液態氮比較好嗎?
04/27 22:47, 9F
文章代碼(AID): #19uWmaqM (Biotech)