[討論] 抽protein它卻一直無法全溶??
是這樣的~
我們用TRIzol reagent抽完DNA及RNA
再把抽完DNA留下的上清液繼續抽取protein~
因為之前已經做過兩次了都沒有什麼問題~
(頂多做完最後一個步驟放進乾浴器裡面overnight隔天早上就溶了)
protocal上面本來是寫說加完1% SDS以後放乾浴器30min~1hour就可以了
但可能因為1.5 ml eppendorf的底部比較尖的關係所以需要放比較久
但是禮拜四我們抽了第三批的protein~
做完以後我們下午放進去乾浴器本來打算當天晚上就去收的
但是去看pellet還沒有溶
好吧那就讓它放到禮拜五早上總會溶了吧!!
但是並沒有...
等到下午三點考完試去看還是沒有!!
(好像只有2~3管是有全溶的...)
算一算都放在乾浴器裡面快24小時了....>"<
後來等到禮拜六才去收@@不過還是沒有全溶...
其實我很擔心protein在55~56度的環境裡面太久是不是會denature??
而且沒有全溶就收(有點像是衛生紙棉絮泡在水裡那種薄薄的塊狀)
以後拿來做western會不會有不良影響?
而且可以幫我判斷有可能是哪個步驟不對嗎??
學姊初步判斷是我們將pellet拿去air dry的時候沒有dry徹底!
對不起...因為實驗的經驗太少又是低年級
所以很菜不知道問題在哪裡很緊張,
也不知道是否有嚴重性(ex:影響日後實驗)
所以PO上來想各位資深的鄉民賜教摟~~>"<
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