[閒聊] FLAG/HA/His/MYC tag的比較

看板Biotech作者 (狗狗)時間15年前 (2009/03/31 17:11), 編輯推噓12(12推 0噓 8→)
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常見的peptide tag有FLAG/HA/His/MYC tag這幾種 我google了一下 鮮少有人做出這四種的比較圖.... 之前上課有聽老師說His tag純化或是Western會比較髒 FLAG效果比較好 但學姐卻說FLAG很髒 His tag比較好 請問有人對這幾種tag有比較明確的了解嗎？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.129.77.13
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03/31 17:49, , 1F
抗體的品質比較重要
03/31 17:49, 1F
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03/31 18:12, , 2F
有些東西是怎麼洗也會殘留的...萬惡的HSP跟Actin..
03/31 18:12, 2F
推
03/31 22:35, , 3F
做出來髒不髒跟你抗體品質還有你洗的操作這些比較有關
03/31 22:35, 3F
推
04/01 18:40, , 4F
flag很髒?!flag抗體好到1:50K都還染得出來~效果超好~
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04/01 18:41, , 5F
不過his到目前為止還沒用過乾淨的就是了~^^"
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04/01 21:39, , 6F
我說的髒是背景很髒～
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04/01 22:00, , 7F
這裡面都要用抗體辨識tag做純化,除了His,它通常用Ni-NTA等
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04/01 22:02, , 8F
離子抓polyHis,而很少用抗體做,因此His特異性不夠高容易髒
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04/02 00:35, , 9F
我的意思就是指,說flag會髒~是不是抗體濃度太高了?!
04/02 00:35, 9F
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04/02 08:14, , 10F
不懂背景很髒是啥意思..IP的髒是指non-specific吧?
04/02 08:14, 10F
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04/02 08:16, , 11F
western做出背景黑黑的那是western技術問題
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樓上~有些抗體的specificity真的比較差,所以背景會髒~
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04/02 11:06, , 13F
同張membrane不同抗體hytbrid,背景值就會不同~
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04/02 11:36, , 14F
現在的Flag不是都指定sigma M2嘛- -a
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推樓上~sigmaM2好用又乾淨~會髒就是WB作太差或Ab濃度太高
04/02 11:48, 15F
推
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我們家試過FLAG/HA/Myc..結果發現跟接的construct有關
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04/07 01:12, , 17F
並沒有一定的定論...要測試!!有的接Flag好 有的接myc好
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04/07 10:40, , 18F
若同是pcDNA3接myc-His or V5-His V5認的比較好
04/07 10:40, 18F
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11/11 01:22, , 19F
抗體的品質比較重要 https://muxiv.com
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01/03 16:53, 5年前 , 20F
不懂背景很髒是啥意思. https://daxiv.com
01/03 16:53, 20F
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