[求救] 請問關於sequencing中加入dGTP
請問版上各位先進，不知是否有遇過以下的情況
送定序時，懷疑plasmid會有二級結構，因此在定序時加入dGTP
但定序出來的結果反而不符自己的期待？ 即序列跑出我不認識的序列
先說明送定序前的作業:
小妹我將PCR product clone進pGEM-T vector
隔天利用colony PCR挑有insert的colony，養菌抽plasmid，之後送T7定序
定序時告知操作人員會有二級結構
我總共送兩批，第一批只有加enhancer時，定序出來的結果是我的序列
但定序效果不甚佳
所以送第二批定序時，操作人員幫加了dGTP，但卻出現不認識的序列
現在想請問各位到底是那邊出了問題，我想到的可能性有幾種列在下面
1. T7 promoter本身不是很好的定序primer，所以下次換SP6看看
2. dGTP雖會緩解二級結構的問題，但本身也會對定序造成不良影響
3. Plasmid是空包彈，所以定不出來 (關於這一點可能性較小，因第一批已經有結果)
希望聽聽大家的意見，小妹在此先謝過了。
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