[討論] 有關real time PCR 的條件

看板Biotech作者 (名揚四海)時間17年前 (2009/03/19 17:29), 編輯推噓2(2推 0噓 2→)
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最近在學real time PCR 有兩個疑問 希望有經驗的前輩可以說明一下 1.我用SYBR GREEN 手冊裡提到primer濃度不可以太高 避免non specific 這樣是不是表示我要每個gene都先用agarose gel跑一遍 調到至少肉眼看不見primer-primer band? 還是說我開始的primer濃度大家一樣就行了? 2.手冊裡用的cycle都是40個 比一般PCR高了不少 但我聽說PCR cycle太多產物反而會degrade 請問有這回事嗎? 我是否應該調整cycyle數呢? 以上兩個問題 請有經驗的高手指點一下 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.55.237
推
03/19 21:44, , 1F
Roche LightCycler480 最終濃度0.03uM OK
03/19 21:44, 1F
推
03/19 22:39, , 2F
起初先用agarose gel跑是必要的..因為至少要做到只有sing
03/19 22:39, 2F
→
03/19 22:40, , 3F
single band，但最終還是要上機跑過disociation才能確認
03/19 22:40, 3F
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03/19 22:40, , 4F
是不是有non specific band
03/19 22:40, 4F
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