[求救] 小於15kd的蛋白在跑western都不見了

看板Biotech作者 (逼愛撫)時間17年前 (2009/02/21 22:01), 編輯推噓4(4推 0噓 9→)
留言13則, 6人參與, 7年前最新討論串1/1
請問一下板上的大大 我最近在跑小分子的western blot 可是在跑膠的時候小分子蛋白就都不見了... 我的膠是12%的separating gel 跑的時候先跑80V轉120V 可以先排除跳海的可能性 因為最小10kd的marker都還看得到 而且15kd大小的蛋白質還在膠的中間... 跑完之後去染comassie blue只有15~20kd以上的蛋白質看得到 @@ 小於15kd的都很乾淨 囧 可以請問這是什麼情形嗎@@ 有什麼方法可以改善呢? -- PS 我是用SDS-PAGE 有爬文過可能用tricine的方法會比較好 不過如果要用SDS-PAGE的方法 有什麼辦法可以讓我的小分子起死回生嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 119.77.163.157
推
02/21 22:08, , 1F
你的acryamide是29:1的嗎!?小分子好像用60:1的跑比較好
02/21 22:08, 1F
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02/21 22:08, , 2F
不過建議你PAGE還是用銀染比較準~comassie blue靈敏度差
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02/21 23:15, , 3F
嗯嗯 我的是29:1 commercial的...
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02/21 23:16, , 4F
明天我去實驗室看看有沒有銀染的材料好了XD
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02/21 23:16, , 5F
謝謝leo大大哦^^
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推
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你comassie blue染色是transfer之前還是之後?
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02/22 10:40, , 7F
transfer之前
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推
02/22 20:15, , 8F
tansfer之後還染的到也很神奇XDDD
02/22 20:15, 8F
推
02/23 11:35, , 9F
可改用孔隙較小的membrane做transfer,一般常用的是0.45um,
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02/23 11:36, , 10F
小於20KDa的protein容易穿過,可改用0.22um的試看看
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02/23 15:14, , 11F
我用的已經是0.2um的了說QQ
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11/11 01:18, , 12F
我用的已經是0.2um https://muxiv.com
11/11 01:18, 12F
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01/03 16:51, 7年前 , 13F
明天我去實驗室看看有沒 https://noxiv.com
01/03 16:51, 13F
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