[求救] lentivirus production

看板Biotech作者 (隨風起飛)時間17年前 (2009/02/20 00:37), 編輯推噓3(3推 0噓 5→)
留言8則, 3人參與, 最新討論串1/1
我想請教大家有關於lentivirus的production 本實驗室是採用中研院RNAi core facility的系統 在做幾次production後,發現就算是control virus (shLuc)也是titer變化相當大 R.I.U.從100多到30000 IU/ul都有過 (用A549. Resazurin assay) 293T 是解凍後3~5代, transfection滿度約70~80% (60 mm dish) plasmid是用Geneaid Midi kit抽的. OD ratio落在1.8~1.85之間 用lipofectamine 2000 transfect 3 hr, DNA: lipo= 1:1 transfection efficiency約70~80% 兩次收細胞時間點看細胞狀況都還ok,沒有大量死亡的現象 有點不太知道問題出在哪裡 希望大家幫忙解惑一下.謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.217.162.25
推
02/22 01:03, , 1F
lentivirus就是這樣... 到現在還有一堆人在發lentivirus
02/22 01:03, 1F
→
02/22 01:04, , 2F
optimization的paper... 滿多condition要試的
02/22 01:04, 2F
→
02/22 01:05, , 3F
而且感覺上並沒有什麼邏輯.. 如果不是要大量生產
02/22 01:05, 3F
→
02/22 01:06, , 4F
就多是幾次取最好的titer就好..
02/22 01:06, 4F
推
02/26 16:22, , 5F
我是用QIAGEN midi,結果還好。plasmid conformation才是
02/26 16:22, 5F
→
02/26 16:24, , 6F
影響transfection效率的主因。另請確認Lipo與DNA的ratio
02/26 16:24, 6F
→
02/26 16:27, , 7F
1:1似乎太低了，試試用Lipo2000:DNA=3:1
02/26 16:27, 7F
推
03/23 22:37, , 8F
lipo太少了 請看他的說明書
03/23 22:37, 8F
‣ 更多 ymme 的文章
文章代碼(AID): #19dOhSNF (Biotech)