[討論] 關於western blot

看板Biotech作者 (湛藍)時間17年前 (2009/02/14 14:55), 編輯推噓5(5推 0噓 14→)
留言19則, 7人參與, 7年前最新討論串1/1
常常看到有人說 一抗可以室溫兩小時 或是四度C OVERNIGHT 我想請問的是 是怎樣的情況下 可以室溫兩小時 那可以四度C OVERNIGHT三十六小時以上嗎??? 之前有聽說好像只有像 GAPDH等之類的才可以室溫下兩小時 最近作WB 有了這些的疑問 特請來請教各位 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.74.48.145
推
02/14 15:02, , 1F
36...overday?
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02/14 15:12, , 2F
是的!
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02/14 15:15, , 3F
只是好奇可以超過三十六小時嗎@@?因為既然都OVERNIGHT了
02/14 15:15, 3F
推
02/14 15:15, , 4F
我染過40min 跟o/n的沒什麼差別
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02/14 15:23, , 5F
請問 四十分鐘是室溫嗎?
02/14 15:23, 5F
推
02/14 18:43, , 6F
可以的 只要你壓的蛋白夠穩定，不會因為時間越長而分解
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02/14 18:45, , 7F
基本上有事不能繼續，一直在一抗裡泡著超過一天是OK的
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02/14 18:46, , 8F
室溫一小時通常是鍵結很強的抗體，例如actin，趕時間會這樣
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02/14 18:47, , 9F
用，其實一抗趕時間可以室溫3hr，只是這樣稀釋的抗體會因為
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02/14 18:48, , 10F
室溫過久而產生雜菌，會出現雜band，不能reuse太多次這樣
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02/14 20:10, , 11F
喔喔 了解 謝謝!!
02/14 20:10, 11F
推
02/16 06:09, , 12F
一搬來說我都是做 1hr @RT 因為這樣當天就可以知道結果
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但是當排時間的時候也是 O/N 甚至過週末也在作XD
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泡久的畫像上面tincta大說的怕生雜菌(牛奶會酸掉)要冷藏
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不過還是儘量不要放超過一天啦，pH 如果變酸抗體會掉下來
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推
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NaN3是大家的好朋友
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不過二抗要用 HRP 的話, wash 要很徹底
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11/11 01:17, , 18F
不過還是儘量不要放超過 https://noxiv.com
11/11 01:17, 18F
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01/03 16:51, 7年前 , 19F
不過二抗要用 HRP https://daxiv.com
01/03 16:51, 19F
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