[求救] fibroblast可以凍嗎?

看板Biotech作者 (winterhsu)時間17年前 (2009/02/14 01:12), 編輯推噓11(11012)
留言23則, 8人參與, 7年前最新討論串1/1
我之前養firbroblast 曾經有試過先凍個1~2個禮拜再解凍是可以活的 可是最近去解凍fibroblast的時候 全部都沒有活 我有的凍在-70有的是凍在液態氮 可是解凍的結果卻是都沒有活 因為我們實驗室之前沒有做過fibroblast 所以也不太知道要怎麼用 只是照網路上找到的paper裡面的方法來養 想問一下大家... fibroblast可以凍起來嗎?! 還是說有什麼條件呢?! 謝謝大家~~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.161.215.135

02/14 11:04, , 1F
可以,一般標準冰細胞程序就可以了
02/14 11:04, 1F

02/14 15:15, , 2F
恩...可是我們凍起來的細胞卻都死光了,好煩惱喲!!
02/14 15:15, 2F

02/14 18:04, , 3F
你應該給的是你的PROTOCOL 才看得出是哪裡出問題
02/14 18:04, 3F

02/14 22:17, , 4F
你應該說明你的fibroblast是primary culture還是cell line
02/14 22:17, 4F

02/14 22:18, , 5F
cell line的話,把細胞凍起來已經是標準程序了
02/14 22:18, 5F

02/14 22:19, , 6F
primary culture的話,也許有點麻煩,不過應該還是能凍起來
02/14 22:19, 6F

02/14 22:20, , 7F
這樣比較好幫你找出問題在哪...
02/14 22:20, 7F
我的fibroblaat 是 primary culture 當初養的時候,是先把皮膚切成很小塊,貼在dish上面 之後就慢慢長出來了,之後有陸續凍起來,第一代到第五代 剛開始凍的時候我有先凍兩個禮拜再解凍,確定有活 之後就開始一直陸續把細胞凍起來,可是在去年12月的時候 就發現解凍之後不會活,一開始以為是我自己凍的問題 可是後來把-70的全部都解凍了也沒有活,前幾天又去把液態氮裡面的拿來解凍,也都沒有活 所以才想要問一下大家 ※ 編輯: winterhsu 來自: 118.161.215.135 (02/14 23:28)

02/15 23:05, , 8F
後期可以提高FBS濃度來凍細胞 15% 20%試試看
02/15 23:05, 8F

02/16 00:27, , 9F
考慮用90%FBS+10%DMSO來凍嘛?!
02/16 00:27, 9F

02/16 00:39, , 10F
自己都是冰primary 沒問題 提高SERUM濃度是一個好方法
02/16 00:39, 10F
我們實驗室一直都是用90%FBS+10%DMSO,以前都沒有問題 這次fibroblast才發生這樣的情形 ※ 編輯: winterhsu 來自: 203.68.60.155 (02/16 15:10) ※ 編輯: winterhsu 來自: 203.68.60.155 (02/16 16:08)

02/16 17:07, , 11F
你是用漸凍盒?!如果不是~那是怎樣的流程呢?!
02/16 17:07, 11F

02/16 17:08, , 12F
不過你凍沒多久的可以活~理論上凍細胞的流程應該沒問題
02/16 17:08, 12F

02/16 20:12, , 13F
把細胞切下來,離心,然後加DMSO,加到冷凍小管,拿去冰
02/16 20:12, 13F

02/16 20:13, , 14F
我大概都是一盤10cm dish 凍3~4管
02/16 20:13, 14F

02/17 04:54, , 15F
那DMSO跟DMEM比例多少?另外,你這樣似乎有點稀。
02/17 04:54, 15F

02/17 09:46, , 16F
我們是用FBS取代DMEM
02/17 09:46, 16F

02/18 05:19, , 17F
我們是用full medium+DMSO凍的,一盤T75凍一管,解會活
02/18 05:19, 17F

02/18 05:20, , 18F
不過如果解凍過久或是離開液態氮太久,解出來存活率很低.
02/18 05:20, 18F

02/18 05:26, , 19F
所以你可能是凍太稀吧,看起來只有這裡不同...
02/18 05:26, 19F

02/18 05:28, , 20F
還有就是凍細胞的配方也不同,你參考看看囉~
02/18 05:28, 20F

02/18 06:50, , 21F
恩˙˙那我再試試看好了~ 謝謝大家的意見!!
02/18 06:50, 21F

11/11 01:17, , 22F
考慮用90%FBS+1 https://noxiv.com
11/11 01:17, 22F

01/03 16:51, 7年前 , 23F
後期可以提高FBS濃度 http://yofuk.com
01/03 16:51, 23F
文章代碼(AID): #19bQeOIr (Biotech)