[求救] PCR 為你而P

看板Biotech作者 (孤光天使)時間15年前 (2009/01/23 10:52), 編輯推噓8(807)
留言15則, 11人參與, 5年前最新討論串1/1
我要P一個蛋白的rna 我的cell line ratio 2點多 然後 我的actin 和 另一種蛋白的rna 都p的出來 唯獨我最近要做的都做不出來 之前還可以 最近新買的primer(序列一樣)就做不出來了 整條是模糊的(應該就是什麼大小的片段都有 整條糊的) 步驟沒有改過 就是 1.94度 1分鐘 2.57度 1分鐘 3.72度 1分鐘 兩個cycle 4.94度 1分鐘 5.65度 1分鐘 6.72度 1分鐘 41個cycle 這是由paper看來的 請問 還有什麼可以改嘛 還是ratio 一定要在1.8~2.0才可以阿 另外 之前可以P的出來的時候 RT的步驟的加熱 我們家的機器加熱蓋沒有啟動 這樣 還P的出來 == -- █▆▅◣ ▄▅▆▇ ◥▇▆▅▃ █ ▉ ▃ ◥▆▅▍ ◤ ▊ █ ▉ ▃▅▆▇◤ ▅▃▄ ▅▆▆▅▄ ▋ ▉ ▊▅▆◤ ˊ █ ▌ ▋ ▊ ▄▃▅ ◥▆▇█ ▍ ▊ █▇▆ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.67.249

01/23 11:29, , 1F
RT PCR??
01/23 11:29, 1F

01/23 11:53, , 2F
試著 +5% DMSO或是touchdown PCR看看能不能跑出來
01/23 11:53, 2F

01/23 11:54, , 3F
我個人絕得可能是primer沒有work..
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01/23 12:01, , 4F
DMSO的作用是? 我比較疑問 那兩個cycle的用意是?
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01/23 12:32, , 5F
加betaine 或 換機器 或 換enzyme 做做看
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01/23 13:01, , 6F
上蓋沒加熱 管內水分蒸發 RT反應體積改變
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01/23 13:03, , 7F
換新primer的廠商有變嗎? 其實我也比較同意b大第二行
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01/23 16:39, , 8F
貼個電泳照片 會比較容易發現問題
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01/23 20:11, , 9F
什麼是"為你而P"?
01/23 20:11, 9F

01/26 19:07, , 10F
回樓上 那是梁靜茹以前的歌
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01/30 17:18, , 11F
每個廠商做的PRIMER都不盡相同 根據經驗 給一樣的序列
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01/30 17:19, , 12F
做出來的狀況千奇百怪 甚麼情形都會出現
01/30 17:19, 12F

02/04 18:16, , 13F
DMSO, Glycerol, betaine可以穩定反應進行改善PCR效率
02/04 18:16, 13F

11/11 01:15, , 14F
回樓上 那是梁靜茹以 https://daxiv.com
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01/03 16:50, 5年前 , 15F
回樓上 那是梁靜茹以 http://yofuk.com
01/03 16:50, 15F
文章代碼(AID): #19UJ3cuL (Biotech)