[求救] 抽RNA時 260/280 高於2

看板Biotech作者 (戰勝自己)時間15年前 (2009/01/15 23:22), 編輯推噓7(7012)
留言19則, 7人參與, 5年前最新討論串1/1
我在抽RNA的時候 260/280 常常都在2.1上下 不會低於2 260/230 也在1.3~1.5中間跑 想知道該怎麼操作才能把有機溶劑抽乾淨 我把步驟po上來 不知道哪裡可以改進 trizol 0.5ml--->5 min 靜置 抽到enppendoft 加氯仿 0.1ml--->vortex 15sec 3min靜置 離心 12000rpm 4度 15min 抽上清液0.2ml 至新的enpendoft 加isp 0.25ml 上下搖均勻 靜置10min 離心 12000rpm 4度 10min pellet出現 倒掉液體 用幫浦把管壁的液體抽乾 加75%酒精 0.75ml wash 不過此時我並沒有把pellet打下來 還黏在底部(我最有疑問的地方) 離心 12000rpm 4度 5min 倒掉酒精 用幫浦抽到不能再抽 airdry(抽乾時發現pellet成透明狀)5min 回溶60度 10min ___________________ 謝謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.67.249

01/15 23:37, , 1F
請問你是抽植物還是動物? sample用量是多少?
01/15 23:37, 1F

01/16 00:09, , 2F
動物的 我收6well 一格加0.5ml trizol
01/16 00:09, 2F

01/16 00:28, , 3F
我是做植物的 可是很好奇你為啥會覺得有機溶液抽不乾淨?
01/16 00:28, 3F

01/16 00:29, , 4F
是因為260/280 太高的話 降低sample量提高trizol量可試
01/16 00:29, 4F

01/16 00:51, , 5F
老師說 260/280高於2是isp沒抽乾淨...
01/16 00:51, 5F

01/16 01:02, , 6F
囧.... ipa會揮發吧?..............................??
01/16 01:02, 6F

01/16 01:03, , 7F
喔我的ipa=你的isp...
01/16 01:03, 7F

01/16 10:04, , 8F
酒精用幫浦抽乾後 再spi n down~ 再吸一次
01/16 10:04, 8F

01/16 16:22, , 9F
最後那次酒精我有用過99%酒精來洗 然後我會換新的管子去裝
01/16 16:22, 9F

01/17 11:27, , 10F
加入氯仿後抽上清液太靠近分層的部份就放棄吧!
01/17 11:27, 10F

01/17 11:28, , 11F
75%酒精把pellet打下來搖一搖是ok的
01/17 11:28, 11F

01/17 11:29, , 12F
airdry之前可以先倒蓋在衛生紙上吸乾 縮短乾燥時間
01/17 11:29, 12F

01/17 11:31, , 13F
大概airdry1~3分鐘即可 所有步驟越快越好
01/17 11:31, 13F

01/17 11:32, , 14F
另外就是回溶的溶液您是用啥呢?這也很重要
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01/17 18:25, , 15F
用水溶的~有甚麼不同嗎/
01/17 18:25, 15F

01/17 19:54, , 16F
用DEPC水吧! 普通滅菌水中仍然會有RNase
01/17 19:54, 16F

01/21 10:52, , 17F
印象中RNA的260/280最好是介於1.9-2.1的樣子
01/21 10:52, 17F

11/11 01:15, , 18F
囧.... ipa會 https://daxiv.com
11/11 01:15, 18F

01/03 16:50, 5年前 , 19F
airdry之前可以先 https://daxiv.com
01/03 16:50, 19F
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