[求救] 跑SDS-PAGE 時會暈開

看板Biotech作者 (飛魚)時間15年前 (2009/01/13 18:25), 編輯推噓11(11推 0噓 11→)
留言22則, 11人參與, 5年前最新討論串1/1
想請問板上的前輩有沒有類似的經驗 就是我在跑SDS-PAGE時，sample沒有辦法集中成一條線 跑過stacking gel之後 會糊開來 我第一次發現這問題時，因為很急，我直接把我自己現配的buffer等等都重配 結果仍然出現一樣的問題，我的gel 配法都一直follow實驗室同學教我的 請問有沒有前輩以前也有類似的經驗，有辦法幫我預測看看是什麼地方出問題嗎 PS: marker可以跑開 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.93.133
推
01/13 18:43, , 1F
acrylamide的濃度對嘛？
01/13 18:43, 1F
推
01/13 18:49, , 2F
marker可以跑開 應該是smpale的問題吧? loading dye
01/13 18:49, 2F
→
01/13 18:49, , 3F
比例不對0.0?
01/13 18:49, 3F
推
01/13 18:55, , 4F
你是指跑到stacking gel時,你的dye會糊成一片嗎?!
01/13 18:55, 4F
→
01/13 18:56, , 5F
不過印象中,結果好像不會有很大的影響~band還是很sharp
01/13 18:56, 5F
推
01/13 18:58, , 6F
你有沒有你跑完染色後的照片?
01/13 18:58, 6F
推
01/13 20:40, , 7F
有檢查 pH 對不對嗎？Sample 是用什麼條件煮的？
01/13 20:40, 7F
推
01/13 23:28, , 8F
sample有經過處理嗎？硫酸銨沈澱之類的？
01/13 23:28, 8F
推
01/13 23:53, , 9F
換一台power supply
01/13 23:53, 9F
推
01/14 00:03, , 10F
你有完整跑完嗎？ 有時候跑完的話,會再壓回一條線喔
01/14 00:03, 10F
推
01/14 22:36, , 11F
有也有遇過 在stacking的位置就糊糊的 但是到separating
01/14 22:36, 11F
→
01/14 22:37, , 12F
時,就沒有那麼嚴重,最後western測actin 也不至於造成很粗
01/14 22:37, 12F
→
01/14 22:38, , 13F
的band,也像你一樣,很多buffer都重配了還是一樣,後來有使
01/14 22:38, 13F
→
01/14 22:39, , 14F
別人家的loading buffer,似乎就比較改善了,所以猜測可能
01/14 22:39, 14F
→
01/14 22:41, , 15F
放太久,pH值已經不對了,你參考看看吧
01/14 22:41, 15F
→
01/14 22:41, , 16F
但是同時我同實驗室的同學 跑的時候就上樓上推文講的一樣
01/14 22:41, 16F
→
01/14 22:42, , 17F
跑到後來就變成一直線,明明我跟他就用同一種loading buffe
01/14 22:42, 17F
→
01/14 22:42, , 18F
結果卻出現不一樣,真是見X了
01/14 22:42, 18F
推
01/15 15:57, , 19F
原波是忙實驗忙到忘了做回應嗎? 囧 害我好好奇說~
01/15 15:57, 19F
推
01/21 10:55, , 20F
running buffer的pH值可能會有關係.....
01/21 10:55, 20F
→
11/11 01:14, , 21F
有也有遇過 在stac https://daxiv.com
11/11 01:14, 21F
→
01/03 16:50, 5年前 , 22F
有檢查 pH 對不對嗎 http://yofuk.com
01/03 16:50, 22F
‣ 更多 aflyingfish 的文章
文章代碼(AID): #19R6m3jF (Biotech)