[求救] double digest

看板Biotech作者irongal (!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!)時間15年前 (2008/11/26 03:44)推噓2(2推 0噓 4→)

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我要進行 HindIII 和 BamHI 的 double digest 根據 New Engalnd Biolabs (NEB), HindIII 用 NEB 2 Buffer BamHI 用 NEB "U" Buffer NEB 有加以附註這兩個 enzymes 不適合 double digestion. 要進行 sequential digestion. 請問有人做過 HindIII 和 BamHI 的 double digest 嗎? 可以大略解釋為何 NEB 有這樣的註明? 我有注意到: 1. BamHI 用 NEB 2 Buffer 的 efficiency 是 100% 2. HindIII 用 NEB "U" Buffer 的 efficiency 是 10% 問題: 1. 如果 BamHI 在 NEB 2 Buffer 中有 100% efficiency, 為何還需要用特殊的 NEB "U" Buffer? 2. 我可以理解如果 double digest 在 NEB "U" Buffer 中進行, HindIII 可能會切不好 (畢竟才 10% 而已). 那如果我用 NEB 2 Buffer 呢? 3. 還是說, 除了 buffer 相容性以外, 還有一些特殊理由這兩個 enzymes 一定要進行 sequential digest? 謝謝大家所能提供的建議 :) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 130.189.202.86

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