[求救] 做完ligation發現有contaminte到其他東西

看板Biotech作者 (電影狂)時間17年前 (2008/11/23 18:21), 編輯推噓2(204)
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我目前做construct碰到一個問題,我挑的幾個colony用restriction enzyme切都可以切下 和insert大小,我就把這幾個送去sequencing,我用的是T7 primer,從vector讀進去,可 是做sequecing的技術員說我送的sample有兩個template,的確sequence的圖有些是有兩個 peak,我就用這幾個clone做PCR,可以P出我要的大小,再把PCR product送去sequencing ,又都是我要的東西,因此我懷疑我ligation的時候有contaminte到其他東西,我又把這 幾個clone重新transform嘗試把contamination分離,我再送這些我認為去掉contaminate 的clone去sequencing,結果還是有兩個template,可見我還是沒把他們分開,我想問一下 有人有這樣的經驗嗎,我該怎麼把他們分開。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 219.84.236.37 ※ 編輯: Locutus 來自: 219.84.236.37 (11/23 18:28)

11/23 18:54, , 1F
建議你可以換個primer,vector可能有2個T7,或2個類似的site
11/23 18:54, 1F

11/23 20:01, , 2F
根據data sheet這個vector只有一個T7,不過我不知道有沒有
11/23 20:01, 2F

11/23 20:02, , 3F
類似的site,我會換個primer,不過我比較傾向是污染
11/23 20:02, 3F

11/24 15:42, , 4F
plasmid 稀釋10倍或100倍再去transform呢
11/24 15:42, 4F

11/24 15:43, , 5F
有二個 template可能是e coli帶有二種plasmid
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11/24 15:44, , 6F
稀釋plasmid之後 再用colony PCR check看看
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文章代碼(AID): #19AIwc_0 (Biotech)