[求救] 請大哥大姊們救救小弟的western blot~

看板Biotech作者tsk (:~)時間15年前 (2008/11/21 18:25)推噓7(7推 0噓 0→)

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今天做western呀~ 結果出現很奇怪的情形 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=TskTsk&b=17&f=1951389491&p=0 像這樣應該要出來的band竟然反白了@@? 右邊的直反白是marker 也很怪囧我的實驗步驟是用15%的separating gel protein濃度是50ng/well (positive control)紅色圈起來的地方 250ng/well (samples)黃色大驚的地方* stacking gel用80V跑接下來用120V跑膠 target protein大約是5.8kDa 不大接下來transfer 90V 3小時 blocking 在5% non-fat milk overnight 1抗hybrid overnight wash 2抗hybrid 2~3小時 wash ECL呈色結果就哭哭了嗚嗚嗚 *這裡濃度好像有點低不知道是不是因為這個才反白囧? 就煩請板上先進們幫忙解惑吧~~~感謝大家~~~ ps. 用的是PALL的flourotrans W transfer membrane ps2. 抗體是自己做兔子polyclonal antibody得到的血清抗體會是抗體出問題嗎? 不過之前也做過沒出現這種情形說@@ (只是也沒跑出band就是了XD) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.84.185

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tsubasawolfy

11/21 18:34, , 1^F

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nixo

11/21 19:24, , 2^F

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tsk

11/21 19:46, , 3^F

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