[討論] 可否先染CBG再做Western

看板Biotech作者 (48)時間15年前 (2008/11/18 20:51), 編輯推噓3(305)
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通常傳統的做法是 跑一片cbg跑一片western 先不考慮為什麼要在同一片做cbg又做western 實際做起來的話 就是先將膠fix半小時 再用cbg染一小時~O/N,掃描起來後,用fix buffer(或水)退染 註:我是用cbg-250 colloidal system 最後拿去做wet transfer,blocking、染抗體… 我這樣假設性的做法ok嗎? 只是想問問看有沒人做過XD 然後fix buffer加下去是不是會影響 transfer 效率 不過不加的話染的過程中蛋白質會跑光? 或是 cbg 退染不完全會怎麼樣 … 不同的coomassie system 也沒關係 說說各位的經驗 OR 發揮各位的想像力唄?=w=)> 註二:transfer完直接用 Ponceau S 染也可以看蛋白質在不在啦 不過 sentivity 比較差,而且用數位相機也照不清楚 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.73.6.116

11/18 23:39, , 1F
你做 cbg的目的? 如果只是為了看Trasnfer效率,
11/18 23:39, 1F

11/18 23:39, , 2F
那就把Trasfer過的gel, 再cbg就可.
11/18 23:39, 2F

11/19 07:28, , 3F
通常大家會比較擔心被CBG塞滿的protein能不能被1Ab
11/19 07:28, 3F

11/19 07:29, , 4F
辨識 應該說antibody認的motif是不是還能fit
11/19 07:29, 4F

11/19 08:16, , 5F
我們實驗室是一直用 PonceauS 不過量小就直接不管他照做XD
11/19 08:16, 5F

11/19 20:42, , 6F
有空來試試看CBG染+退染後的transfer效率好了XD再來如果anti
11/19 20:42, 6F

11/19 20:43, , 7F
body能work的話說不定可以成功=w=+,謝大家的意見嘍
11/19 20:43, 7F

11/23 01:39, , 8F
你可以transfer後用 fast green 很便宜又好用 且不影響
11/23 01:39, 8F
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