[求救]推薦 二抗conjugated的螢光分子 (IF用

看板Biotech作者 (sweetE)時間17年前 (2008/11/17 21:59), 編輯推噓10(10推 0噓 20→)
留言30則, 12人參與, 7年前最新討論串1/1
請問 各位大大 是否可以推薦 做IF 所使用的"好用"二抗 (螢光強度 超強) 目前 我所使用的 是FITC 上confocal 根本看不到 訊號極極極弱 染抗體 之前的步驟 已抓過condition 3.7% formaldehyde (fixation) 5% Triton X-100 (permeabilization) 此抗體在別株細胞中 使用Triton X-100打洞 是ok的 所以 我想應該不用換 Detergent 一抗 已經用到 1:25 所以 我想換一種二抗試試 先前跟別家實驗室借用過Invitrogen Alexa Fluro 594 (紅光)，使用1:150 染起來 有比FITC 好一點 不過在新購二抗 之前 想先聽聽大家 是否 用過更好用的 感謝 不吝分享!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.231.1.2
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推alexa488 不太quench~PE蠻亮但很容易quench
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PECy5用顯微鏡看不太好,但跑FACS不錯,alexa不能跑facs
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但顯微鏡看很強!!
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其實我覺得最主要看你要看的東西是甚麼還有你的一抗特不
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特異...
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我們家除了alexa488之外 其它好像都是s.c.的吧...
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S.C.的二抗在我們家大概都是1:150~600不等 但alexa488
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用來看我們家要看的東西的時候只要1:2000
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但忘記是哪家的了 囧
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Alexa488應該是invitrogen，冷泉港比較便宜
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Alexa488 molecular probe
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如果 Alexa 488跟FITC比呢?
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你的問題看起來感覺一抗才是主因...
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後面WASH一直都有T-100嗎?
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我BLOCKING 跟 一抗裡都有5%Triton X-100
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5%很強耶, 我們平常都做0.1~0.5%
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0.3%(舉手)
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tx100 濃度太強, alexa 2'Ab 1:150 太高了..1:1000 差不多
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FITC 其實已經很夠了..除非你要照 Z-axis or timelapse
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讓你看見有沒有 signal 絕對沒有問題
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先確定你的 1'Ab 堪不堪用比較好
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我覺得是T-100太多了干擾到1Ab binding - -a
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sorry 我說錯了~是0.5% Triton X-100.....
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我是照Z axis沒錯，所以在螢光顯微鏡上看還可以 上confocal
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照 z axis PMT開到最大 才勉強能看
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我一二抗都是1%BSA,一抗前先goat IgG block
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那有人推jackson的嗎?...FITC和RRX
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推
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推薦488！強
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150~600不等 但 https://muxiv.com
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01/03 16:48, 7年前 , 30F
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