[閒聊] 精華區 ligation 疑問

看板Biotech作者 (Justin)時間17年前 (2008/11/08 18:40), 編輯推噓5(5推 0噓 10→)
留言15則, 6人參與, 7年前最新討論串1/1
剛剛在逛精華區 有關ligation的第三篇 作者切 EcoRI 和 XhoI 後再做ligation 結果就是有人建議用CIP 可是 明明兩邊切出來 都是cohesive end 為什摸還要用CIP 而且 他們的cutting site 也完全沒有互補 EcoRI 5' G 3' CTTAA XhoI 5' TCGAG 3' C ___________________________________________________ 還是說 作者其實是 切完兩刀後 用enzyme把它都補齊 做成blunt end 所以才要做CIP? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.125.66
推
11/08 18:57, , 1F
有時候多做一個CIP...東西就做出來了
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硬要去找那原因也是不錯...可是蠻耗力的
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以前是聽說長得很像的base可能會亂黏所以就自接起來
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推
11/08 19:21, , 4F
那個 真的要連起來不一定要完全互補歐..
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不管怎麼樣還是有可能自己接起來 當然都sticky end
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11/08 19:22, , 6F
機率可能比較小 但也不是沒有..
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基本上選兩個不同enzyme cutting site本來就很難一樣..
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11/08 19:23, , 8F
不用也可以 用也可以 取決於你XD..有時真的多一個cip就ok
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推
11/08 19:24, , 9F
酵素活性不一,就算努力切兩刀,還是會殘留不少只切一刀,這不
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11/08 19:26, , 10F
就互補了？ 而且這種單切的又比雙切有更高機率ligation
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推
11/08 21:58, , 11F
防兩個vector自黏
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推
11/08 22:50, , 12F
我為了避免自接，只能盡量讓自己的vector切乾淨XD
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11/08 22:50, , 13F
所以我都不做CIP的
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11/11 01:07, , 14F
硬要去找那原因也是不錯 https://noxiv.com
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01/03 16:48, 7年前 , 15F
不用也可以 用也可以 https://noxiv.com
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