[求救] membrane protein extraction

看板Biotech作者 (期待過一天)時間15年前 (2008/11/05 00:07), 編輯推噓4(4推 0噓 4→)
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我最近在做一個memb protein 一開始是收完細胞後 加入lysis buffer只放置五分鐘 就去離心 但是western都壓不到任何東西 後來改了protocol 改成連lysis buffer都不加 直接加loading dye之後就拿去煮 然後跑電泳 可是還是壓不到東西 我的protein liading量也提高了 請問要extract memb protein有什麼特殊的方法或是protocol嗎 我們實驗室目前是不考慮買kit喔 所以希望是傳統的方法 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.217.247.139
推
11/05 01:31, , 1F
PAGE 可以看到你要的Protein? Western ok ?
11/05 01:31, 1F
推
11/05 01:32, , 2F
試試看添加Triton-X 100
11/05 01:32, 2F
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11/05 01:33, , 3F
找跟你用同樣材料, 抽membrane protein分析的.
11/05 01:33, 3F
推
11/06 21:35, , 4F
positive control 有壓到嗎?
11/06 21:35, 4F
推
11/09 23:46, , 5F
loading dye應該可以弄出膜蛋白吧?是不是你抗體有問題?
11/09 23:46, 5F
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11/09 23:47, , 6F
找個膜蛋白的positive control壓壓看 膜蛋白一般量都不多
11/09 23:47, 6F
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11/14 16:27, , 7F
我們目前沒有positive control
11/14 16:27, 7F
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11/14 16:27, , 8F
所以無法確認是不是抗體問題
11/14 16:27, 8F
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