[求救]如何偵測微量表現的膜蛋白

看板Biotech作者 (cothuho)時間15年前 (2008/10/25 22:25), 編輯推噓5(5推 0噓 10→)
留言15則, 7人參與, 5年前最新討論串1/1
這個問題困擾已久 真的需要各位的幫助 小弟目前正在研究一種膜蛋白 他是一種tyrosine phosphatase 在肝臟的表現量很少 以文獻上來看 WB northern都沒有人偵測到過 只有RT-PCR有 我也重複過 的確有 但不強 現在我因為實驗目的的關係 一定要在WB偵測到 抽取whole cell protein後 最高load到500microgram 換過無數抗體都偵測不到 包括自行生產的抗體 現在想用抽取膜蛋白的方式 但是像這種只有RT偵測到的蛋白是不是要非常非常大體積的細胞萃取 才能夠得到足夠WB偵測的蛋白量？ 從來沒有做過偵測這樣微量蛋白的實驗 實在不大清楚這實驗的盡頭在哪裡 強烈懷疑RT的結果是否代表真有protein product的存在 目前我已經有相當多biochem上的成果 但是in vivo上一直卡在證明其表現的上面 還請有經驗的各位幫忙了 感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 76.181.242.213
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密度梯度離心分離?
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推
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組織切片免疫螢光染色有看過嗎? 這敏感度比WB高 此外 RT-PCR偵
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側的是RNA 不能代表蛋白質表現情形 如果您使用的liver可研磨成
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細胞 就可以染色上flow看看
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flow cytometry呢? 抽膜蛋白過程中其實也會lose~
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ultra後，沈在底下的把他用sample buffer洗起來就濃縮嚕
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反正肝臟很大咩 哈哈 還有cellbiochem好像有KIT可以抽
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不過粉貴粉貴粉貴.......
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不瞞各位 免疫染色有考慮過 加上我之前碩士就是靠形態拿的
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但是現在的老闆是作生化的 對這種形態觀察很沒信心 屢次
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建議不得採納 加上也不一定成功 不過現在死馬也得當活馬醫
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ultra是什麼意思啊 是指sucrose的梯度離心嗎？
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ultra 超高速離心
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建議不得採納 加上也不 https://noxiv.com
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ultra 超高速離心 https://muxiv.com
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