[討論] pET-30a

看板Biotech作者 (bolly)時間15年前 (2008/10/21 11:02), 編輯推噓5(5推 0噓 12→)
留言17則, 6人參與, 5年前最新討論串1/1
pET-30a這載體我想要轉到DH5alpha mini-prep抽plasmid 但是抽出的plasmid量總是很低 我再養菌的LB裡有加抗生素 E. coli也都長很好 可是抽出來的plasmid就是很少 這跟我用的菌種有關嗎? 還是大家都用買的= = 我的操作是按照mini-prep kit給的protocol 基本上應該不是操作問題 至於我取的菌量是飽和菌液約2.5ml -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.202.50
推
10/21 11:19, , 1F
有確定它的copy number高嗎- -?
10/21 11:19, 1F
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10/21 11:20, , 2F
pET我用過兩個都是要加多菌量
10/21 11:20, 2F
※ 編輯: bolly 來自: 140.120.202.50 (10/21 11:44)
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10/21 11:44, , 3F
所以大概需要加多少量
10/21 11:44, 3F
推
10/21 12:23, , 4F
養多久?
10/21 12:23, 4F
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10/21 12:26, , 5F
over night的菌液
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10/21 12:27, , 6F
我通常會養12-14hr
10/21 12:27, 6F
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10/21 12:33, , 7F
確認一下Ap有無壞掉? (我遇過Ap壞掉的)
10/21 12:33, 7F
推
10/21 13:04, , 8F
pET系列都是low copy
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10/21 13:05, , 9F
copy number大概是high copy 例如t-vector 的10分之1
10/21 13:05, 9F
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10/21 13:05, , 10F
所以… 養多一點吧~~
10/21 13:05, 10F
推
10/21 13:53, , 11F
養五取四:)
10/21 13:53, 11F
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10/21 16:25, , 12F
瞭解了 感恩 以後把量加多
10/21 16:25, 12F
推
10/22 02:18, , 13F
pET 系列 copy number 約 40, 比起 high copy 的數百
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10/22 02:19, , 14F
少太多了@@ 我們家養 6 mL mini-prep 抽成 50 uL
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10/22 15:56, , 15F
我之前大概6ml回溶100ul 難怪挺少的
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11/11 01:04, , 16F
pET 系列 copy https://muxiv.com
11/11 01:04, 16F
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01/03 16:47, 5年前 , 17F
copy number https://daxiv.com
01/03 16:47, 17F
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