[求救] HEK293T transfection condition

看板Biotech作者 (真的不是距離)時間17年前 (2008/10/14 10:04), 編輯推噓4(4推 0噓 9→)
留言13則, 5人參與, 7年前最新討論串1/1
我之前試過HEK293T做transfection condition如下: 10cm dish, 80% confluency 分別做: DNA(2ug)+1.5cc Opti-MEM Lipofectamine 2000(5ul)+1.5cc Opti-MEM 各混合5mins, RT 然後兩個mix, incubate for 20mins 再加入細胞當中。 細胞沒有serum starvation, 是要加的時候才把medium全部吸掉 換入DNA+lipofectamine 2000以及Opti-MEM mixture 然後incubate for 6~8 hours,再換掉所有的medium,加入complete medium 但是efficiency只有約40% 想要麻煩大家幫我看看，或者是要怎麼做，才能增加他的效率 因為我的實驗，一定要高產量的transfected protein 麻煩大家了，謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.253.190
推
10/14 10:17, , 1F
為啥不用calcium phosphate來做transfection呢?
10/14 10:17, 1F
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10/14 10:18, , 2F
293T用lipo會死一堆吧
10/14 10:18, 2F
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10/14 10:34, , 3F
之前lab用lipo,沒注意到可以用calcium..><..可以分享方法嗎
10/14 10:34, 3F
推
10/14 11:23, , 4F
用電的吧~效率超高也不會死很多~推AMAXA的NUCLEOFECTION
10/14 11:23, 4F
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10/14 11:24, , 5F
之前一株用LIPO大概一兩成~TRY過很多DOSE~用電的變七八成
10/14 11:24, 5F
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10/14 11:37, , 6F
我們實驗室沒有電的system,可能就無法考慮這個方法了,sorry
10/14 11:37, 6F
推
10/14 11:47, , 7F
我們家都用lipo2000 transfect 293T 活得好好的啊
10/14 11:47, 7F
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10/14 11:49, , 8F
invitrogen官方的protocol說10cm dish可以放到24ug DNA
10/14 11:49, 8F
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10/14 11:51, , 9F
lipo2000用60ul 剩下的步驟都一樣
10/14 11:51, 9F
推
10/14 14:54, , 10F
lipo很貴耶 能省就省著點吧
10/14 14:54, 10F
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10/14 14:55, , 11F
磷酸鈣protocol我再寄給原PO
10/14 14:55, 11F
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11/11 01:03, , 12F
invitrogen官 https://daxiv.com
11/11 01:03, 12F
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01/03 16:46, 7年前 , 13F
為啥不用calcium https://muxiv.com
01/03 16:46, 13F
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