[求救] 請問關於lentivirus的製備以及titer的問題

看板Biotech作者 (AFK)時間17年前 (2008/10/09 15:06), 編輯推噓3(3推 0噓 5→)
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各位先進 前輩 大家好 小弟現在使用中研院RNAi core的plasmid來製備lentivirus 我的方法如下: 第一天時 Seeding 5X10^5 HEK293T cells 在6 well plate中 第二天時 以lipofectamine 10ul + plasmid (pLKO.1-shRNA pCMV-delta 8.91 pMD.G各 2ug) + 1ml serum-fREE DMEM做transfection,在transfection 4小時後 換成3ml30%FBS DMEM,之後在transfection後24小時 48小時收病毒 但是所收到的病毒以RNAi core上提供的RIU方式來測titer (不同處為我是使用HEK293T cell 而且在最後一天時我是以MTT來觀察細胞的viability) 可是發現所得到的病毒 titer非常差 細胞的survival rate最高只有10% 請問我有哪個步驟需要做改善或調整 才能使我的lentivirus有更好的titer -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.129.77.155
推
10/09 17:30, , 1F
我也正在做耶...不過是第一次= =a
10/09 17:30, 1F
推
10/09 18:31, , 2F
30%FBS會不會太高啊~我們都減半耶~減少FBS中和virus
10/09 18:31, 2F
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10/09 18:32, , 3F
可以試試10%FBS養就可以了~且transfection完直接補medium
10/09 18:32, 3F
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10/09 18:33, , 4F
不要去除transfection的medium
10/09 18:33, 4F
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10/09 18:34, , 5F
ps.10%FBS是沒有減半的量,狀況好的話可以改用5%FBS就好了
10/09 18:34, 5F
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10/09 18:35, , 6F
另外~pLKO.1和另外1個helper plasmid不是有固定比例?!
10/09 18:35, 6F
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10/09 18:35, , 7F
helper plasmid是用來幫助package的,太多會都是空包彈
10/09 18:35, 7F
推
10/10 11:25, , 8F
中研院系統有點怪怪的,最好換一套系統!!
10/10 11:25, 8F
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