[求救] RE Digestion

看板Biotech作者 (小準備!)時間17年前 (2008/10/05 22:35), 編輯推噓2(201)
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由於上週做了一次ligation之後盤子也長了幾個colony 就快快樂樂的養了菌,抽了DNA(geneaid的kit),就直接用我接進去的site (AgeI-insert-BamHI),之前這個組合拿來切Vector跟Insert都很順利 可是拿來切construct的時候,就發生了意想不到的狀況。 切完的結果非常詭異,很像是gel不小心用水配的結果(可是ladder是完整的,膠沒錯) 每一個well下面都沒有band,而是很亮的類似comet tail的東西。(跟sono很像= =) 懷疑是colony或RE的問題就分開來切,但是結果single digestion結果都合理。 也都出現single band,長度也接近(約8.3kb)。 這樣的狀況還有那些可能呢? 目前已知: 1. RE沒問題 2. DNA,或許,沒問題。 那剩下的可能是? 3. methylation interference? 4. 我手殘?(雖然不想承認,但是先懷疑自己比較好,可是我repeat兩次了) 5. 換一組RE來切? 6. 直接拿去transient transfect看reporter gene算了? 拜託幫我解個惑吧...Orz -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.135.72.79

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送定序最準
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假設沒有其他常見的出錯下,看你選的RE會覺得明顯是問題所在
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為了double digest屈就buffer,又用了常有star activity的RE
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文章代碼(AID): #18wD2dc8 (Biotech)