[求救] RE Digestion
由於上週做了一次ligation之後盤子也長了幾個colony
就快快樂樂的養了菌,抽了DNA(geneaid的kit),就直接用我接進去的site
(AgeI-insert-BamHI),之前這個組合拿來切Vector跟Insert都很順利
可是拿來切construct的時候,就發生了意想不到的狀況。
切完的結果非常詭異,很像是gel不小心用水配的結果(可是ladder是完整的,膠沒錯)
每一個well下面都沒有band,而是很亮的類似comet tail的東西。(跟sono很像= =)
懷疑是colony或RE的問題就分開來切,但是結果single digestion結果都合理。
也都出現single band,長度也接近(約8.3kb)。
這樣的狀況還有那些可能呢?
目前已知:
1. RE沒問題
2. DNA,或許,沒問題。
那剩下的可能是?
3. methylation interference?
4. 我手殘?(雖然不想承認,但是先懷疑自己比較好,可是我repeat兩次了)
5. 換一組RE來切?
6. 直接拿去transient transfect看reporter gene算了?
拜託幫我解個惑吧...Orz
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