[求救] western blot染出的band不見!

看板Biotech作者 (soceress)時間15年前 (2008/09/04 00:29), 編輯推噓4(4推 0噓 17→)
留言21則, 6人參與, 5年前最新討論串1/1
我的第一個lane是marker,第二個lane開始是sample 在所有過程都over後以ECL呈色 常常會在70KD的位子,第二個lane的band不見了 marker和第三個以後的lane 70kd 的band都還在 看起來都很正常 向別人家借過硬體部份,結果還是一樣 之前做都不會這樣... 那個位子是確定要染出東西來的... 第二條lane的其它分子量部份..比如說 actin,或是再小的protein 都有正常出現 請問有沒有哪位知道這是哪裡出了問題呢?? 為什麼就第二條lane,70KD的band不見了......???? 感謝回答!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.165.221.71
推
09/04 14:09, , 1F
這是單次實驗的結果嗎 同一隻sample再跑一次看看
09/04 14:09, 1F
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09/04 14:10, , 2F
不知道你的sample是什麼 根本無從判斷
09/04 14:10, 2F
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09/04 14:11, , 3F
ECL沒泡到？
09/04 14:11, 3F
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09/04 16:09, , 4F
同一批sample跑過5次,不同的sample也跑過超過3次,
09/04 16:09, 4F
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09/04 16:11, , 5F
結果有1次-2次是有染到,ECL也很確定足量..
09/04 16:11, 5F
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09/04 16:12, , 6F
sample:rat spinal cord
09/04 16:12, 6F
推
09/05 02:52, , 7F
壓片時肉眼是否可看見膜在發亮，你第二條lane是否要比눠
09/05 02:52, 7F
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09/05 02:52, , 8F
第三條lane強?
09/05 02:52, 8F
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09/05 14:12, , 9F
ㄟ..正常的結果第二條本來就會比較弱,
09/05 14:12, 9F
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09/05 14:14, , 10F
所以我不敢說第二條比較弱是因為飄走得比第三條多
09/05 14:14, 10F
推
09/06 22:12, , 11F
預期會出現band的量是否為高含量?有可能是燒掉了
09/06 22:12, 11F
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09/07 14:40, , 12F
和其他幾個lane的sample比起來是相對高量
09/07 14:40, 12F
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09/07 14:41, , 13F
請問"燒掉"是??? (它transfer後都還是冰涼的)
09/07 14:41, 13F
推
09/07 19:30, , 14F
燒掉指的是蛋白含量或抗體量過高使得冷光試劑瞬間被消耗完
09/07 19:30, 14F
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09/07 19:31, , 15F
通常會出現"反白"的現象,可以看看PVDF是否帶有黃色的沉澱
09/07 19:31, 15F
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09/07 19:32, , 16F
可以嘗試看看降低1,2抗的濃度
09/07 19:32, 16F
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09/09 11:18, , 17F
正常應是sample 1<2,2略小於3, 所以我想可能不是燒掉了
09/09 11:18, 17F
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09/09 11:19, , 18F
我上次反序loading sample,結果也還是同個位置不見
09/09 11:19, 18F
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09/09 11:20, , 19F
快瘋了…^^||
09/09 11:20, 19F
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11/11 00:57, , 20F
ㄟ..正常的結果第二條 https://noxiv.com
11/11 00:57, 20F
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01/03 16:44, 5年前 , 21F
ECL沒泡到？ http://yofuk.com
01/03 16:44, 21F
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