[求救] TA cloning後抽plasmid跑膠是smear>o<

看板Biotech作者 (GO PUNK!)時間17年前 (2008/08/29 08:48), 編輯推噓3(3推 0噓 5→)
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我是將1.7~2.3kb 左右的PCR產物作TA cloning PCR product purify後有取2 ul跑膠check gel extraction的量是ok的 ligation是用16度 O/N 塗盤長菌也ok (藍白clon都有 白多藍少) 挑菌放大也ok 菌量很夠抽plasmid 我是用v牌kit 抽完plasmid想跑個膠check一下(0.4% agarose)(我的vecter是3.9kb) 結果跑出來大約在6kb處呈現一片smear >______<o 我重新挑菌養菌抽了兩次 一次用elution buffer一次用水 兩次跑膠都這樣 第一次用elution bffer時跑膠唯一有個sample有band的 居然是出現在不是3.9k的位置也不是6k左右的位置 而是2k....=.= 請問... 到底是那兒有問題 嗚嗚...data趕不出來... clong菜鳥....唉... -- REVOLUTION REVIVAL UNDER GROUND OF K.H -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.120.112.102
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08/29 09:02, , 1F
實驗室不能上bbs如果有好心人解答 可以寄e mail嗎...
08/29 09:02, 1F
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08/29 09:03, , 2F
jingmei0112@hotmail.com 感激不盡^____^o
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推
08/29 14:23, , 3F
plasmid要切成直線才能跑出確切的大小
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08/29 14:23, , 4F
如果你沒有用酵素切過的話,我猜2k的那個就是XD
08/29 14:23, 4F
推
08/29 15:14, , 5F
沒切過的質體呈supercoil跑的位置不一定
08/29 15:14, 5F
推
09/03 21:30, , 6F
質體在抽出來後大致會有超螺旋狀、環狀、斷掉的線狀三種
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但超螺旋通常看不到，環狀就是一大坨在你質體大小以上
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線狀就會出現在你預測大小的位置，仔細看看應該會有！
09/03 21:33, 8F
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