[求救]請問PCR products用restriction enzyme切的問題

看板Biotech作者 (...)時間16年前 (2008/08/14 00:48), 編輯推噓3(301)
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版主不好意思!!此篇是幫我姊姊代po的,如有不妥煩請告知,我會馬上刪除, 還有如果文章有什麼地方錯誤請多海涵。 ==============================以下為正文======================================= 請想問一個關於使用restriction enzyme的問題,因為認識的沒有這領域專長 請問PCR products用restriction enzyme切的問題的所以想請問各位。請各位救救 我這位新手。 我在還沒切的PCR products 是198 bp,使用restriction enzyme是會分成為 20bp、78bp,但切前和切後我發現,切前marker 的100bp指標下每個sapmle 都會有霧霧的一條(有的人說那是primer的殘留,但後來跑PCR時我的primer 只加1μL,原本這樣的情況已經不見了,但這次我換了另ㄧ家廠商的Taq,不知 這和Taq的關係大不大 ? 因為換了後這次又出現了那條淡淡的ban),這樣和我 有切的照片看起來,會覺得我有切的那照片真的切出來的下面一條是78bp還是 promer的殘留? 另外一個狀況是,我的templete DNA是口腔黏膜細胞,其實量的品質很不 一定,拿去跑PCR,不切的話ban算亮的,但ㄧ拿去切,就變的很淡,有沒有什 麼方法可以讓他清楚點?? DNA去測OD範圍有點廣 40~800 ng/μL,我一直try 條件,感覺都try不到比較好的狀態。想 請教各位前輩!感激不盡! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.130.73.58

08/14 01:00, , 1F
你的primer濃度多少? 感覺是你Primer太濃了
08/14 01:00, 1F

08/14 01:02, , 2F
切之前有先純化過嗎? 如果clean up過的話,primer會被去除
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08/14 01:33, , 3F
但是,loss會很多喔...
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08/14 01:33, , 4F
不過,只要偵測的話,loss量還是其次
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