[求救] 關於shRNA的藥品污染問題

看板Biotech作者 (霧煞風)時間16年前 (2008/07/25 22:24), 編輯推噓3(302)
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如題 我們實驗室裡剛進了一個新的藥品 RNAi 可是卻在配藥過程污染了T^T 所以現在實驗室內選擇用 把含shRNA序列的plasmid 送到E.coli中去複製 再去把我們要的序列切下放到可表現GFP的質體中 最後轉到cell內,看螢光 就可以看到transfection的效率啦^^ 可是,當我們決定完補救方案時 卻發現了含shRNA序列的plasmid有些大問題在 就是 1.plasmid上只有2個常用RE site,可是有一個RE site上的一個密碼子被mutate掉了 2.該shRNAi序列的位子做成了loop的形狀 現在發現了這些問題 讓我們覺得要進行補救方案好像滿困難的 有沒有板上的大大可以提供些意見的呢 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.105.39.173 ※ 編輯: howaboutme 來自: 59.105.39.173 (07/25 22:34) ※ 編輯: howaboutme 來自: 59.105.39.173 (07/25 22:35)

07/26 12:42, , 1F
shRNA通常都只有幾十個nt大小, 如果你一定要用那個RE site
07/26 12:42, 1F

07/26 12:43, , 2F
建議直接order primer 把錯誤的site改回來 再clone到plasmid上
07/26 12:43, 2F

07/27 13:45, , 3F
loop的形狀不會造成polymerase從template上掉下來?
07/27 13:45, 3F

07/27 13:45, , 4F
額外的發問...懇請解答
07/27 13:45, 4F

07/27 15:58, , 5F
我的意思是重新order含shRNA的oligo再clone一次,不是重新PCR
07/27 15:58, 5F
文章代碼(AID): #18YU8ho5 (Biotech)