[求救] 跑2D膠沒有點??

看板Biotech作者 (@@)時間17年前 (2008/07/17 20:12), 編輯推噓6(608)
留言14則, 6人參與, 最新討論串1/1
新手發問,請多多包涵^^" 最近實驗課要跑二維電泳 sample是綠竹筍 我們先將綠竹筍用果汁機打碎,然後有用acetone洗掉過多的鹽類(洗了五次左右) 並且有用ELISA reader定量,定出來的吸光值在0.2左右 因為老師教我們load 500ug 的 protein , 所以代入標準曲線 換算出來我們 load了 74ul 的sample ,剩下的再用buffer補到200uL (因為我們跑的是11 cm strip) 然後加到holder中,再上礦物油,IEF的條件應該是都沒問題,因為別組的都OK 隔天再把strip放再鑄好的膠上跑,最後跑完並且染完色後,發現只有marker的band 蛋白質的部分都沒有band,怎麼想也想不出原因。 所以來這邊請教一下各位高手,到底是哪裡出問題了呢@@? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 122.120.214.1

07/17 21:38, , 1F
問助教不是更理想? 1D SAMPLE有進去 2D一定有點
07/17 21:38, 1F

07/17 21:39, , 2F
不過我沒看過綠竹筍跑出來的狀況就是了 (遮)
07/17 21:39, 2F

07/17 22:11, , 3F
恩謝謝囉!不過助教叫我們自己回去想 我也覺得是1D的問題
07/17 22:11, 3F

07/17 22:11, , 4F
請問IEF還有甚麼要注意的嗎?
07/17 22:11, 4F

07/17 22:50, , 5F
請問你IEF的TOTAL VHR是多少?
07/17 22:50, 5F

07/17 22:55, , 6F
綠竹筍!! 吳老師~?? XDD
07/17 22:55, 6F

07/17 22:57, , 7F
建議可以先試試先跑SDS-PAGE 看是不是真的有蛋白質!
07/17 22:57, 7F

07/17 22:59, , 8F
SDS page有蛋白質唷!! VHR我沒有記@@"不過是大家一起跑的
07/17 22:59, 8F

07/17 22:59, , 9F
但是只有我們組的沒有band,很怪@@"
07/17 22:59, 9F

07/17 23:00, , 10F
你去看看VHR吧~~多注意看看電壓到底有沒有上去!
07/17 23:00, 10F

07/17 23:01, , 11F
還有strip放的時候是不是沒把空氣擠開~~
07/17 23:01, 11F

07/18 09:15, , 12F
綠竹筍耶~~~好妙~~
07/18 09:15, 12F

07/18 09:15, , 13F
你們有跑金針菇嗎
07/18 09:15, 13F

07/25 17:01, , 14F
金針菇也是真的有人在作...
07/25 17:01, 14F
文章代碼(AID): #18VpTBza (Biotech)