[求救] pET-32a的問題

看板Biotech作者 (owl628)時間17年前 (2008/07/13 19:42), 編輯推噓5(5推 0噓 13→)
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最近要把某段基因接到pET-32a中 利用Sal 1和Xho 1接進去 我們家習慣會把有切根沒切的vector去跑膠做個比較 雖然沒切是circular form,但還是可以跟有切的比較出差異 但是我最近從同一個來源的菌抽pET-32a 結果沒切的pattern會有兩種不同的結果 有時候是這種,有時候是另一種 想請問一下是因為circular form的關係嗎??? 還是怎樣.....???? 麻煩大家了,謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.139.218
推
07/13 21:43, , 1F
SalI和XhoI會自己接起來(compatible cohesive end)所以如
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07/13 21:44, , 2F
果vector和insert都用這兩個酵素切的話,就會看到看到兩種
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大小不同的plasmid了
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推
07/13 21:48, , 4F
分別為vector only及有接進去...不知道有沒有回答到^^"
07/13 21:48, 4F
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07/13 21:57, , 5F
我說的是還沒有做ligation時,就只是把沒切的vector去跑膠,
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07/13 21:59, , 6F
結果沒切的vector這次是這個pattern,下次可能是另一種,就是
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這兩種不同的pattern但明明是同一個來源,所以我不懂為什麼
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07/13 22:00, , 8F
沒切的vector為何會出現兩種不同的pattern,謝謝~
07/13 22:00, 8F
推
07/13 22:50, , 9F
supercoil?
07/13 22:50, 9F
推
07/14 00:21, , 10F
plasmid的form很多 沒切過的話可能每個batch抽的都不同
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07/14 00:23, , 11F
完全不需要理會這種問題 切完是對的大小就OK了
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因為我以前這樣做,其他的vector都只會有一種form出現,只有
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pET-32a會這樣,所以絕得很怪,所以說我不用在意這個現象嗎??
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07/14 08:29, , 14F
謝謝大家的回答^^
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推
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有時候同一個sample 用不同批做的gel跑，長相也會不一樣
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基本上，沒切的plasmid 我只用來看看量或跟切過的plasmid
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對照一下看有沒有切動而已...
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07/15 00:33, , 18F
它跑的位置在哪，基本上我都不在意XD
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