[求救] Western一直出現海苔!!

看板Biotech作者 (土地公爺爺~拜託你了!!)時間17年前 (2008/07/02 21:26), 編輯推噓7(7推 0噓 3→)
留言10則, 8人參與, 最新討論串1/1
想請教各位先進~ 我目前手上有2株cell line HELA , C33A 都是子宮頸癌細胞 想看的protein : Rb , p53 等致癌基因 control用b-actin (Biovision Monoconal mouse) 問題來了~ b-actin 再3T3很明顯 , 但是在HELA或C33A卻看不太到?? 不知出了什麼問題 , 抗體的species reactivity都包含 Hu 還請各位前輩指教可能哪裡出了問題 另外就是Rb , datasheet裡面建議用BSA blocking 結果: 海苔 改以安佳 結果:　海苔 （一二抗皆以blocking solution稀釋） 抗體濃度也由高到低試了很多次~ 結果: 海苔 惠不會是抗體壞了 (聖誕牌....哀) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.21.137
推
07/02 22:15, , 1F
海苔??是啥.....
07/02 22:15, 1F
推
07/02 22:41, , 2F
是說整個well都黑黑的一陀嗎?
07/02 22:41, 2F
推
07/02 22:42, , 3F
是整片黑的叫海苔~~
07/02 22:42, 3F
推
07/02 22:55, , 4F
你1 and 2 抗濃度可以說一下嗎???
07/02 22:55, 4F
→
07/03 11:43, , 5F
一抗1/200 1/500 1/1000都試過~ 二抗1/10000
07/03 11:43, 5F
→
07/03 17:54, , 6F
一抗再稀釋看看，安佳濃度加高些。
07/03 17:54, 6F
推
07/03 20:09, , 7F
1抗 1:2000 試試 安佳以前我是用5%的 不知到您是??
07/03 20:09, 7F
推
07/03 21:27, , 8F
wash不夠 也有可能出現很髒的background
07/03 21:27, 8F
→
07/03 21:28, , 9F
可以試試每10min換一次TBST 總共操作三次或四次 次數可調整
07/03 21:28, 9F
推
07/04 01:22, , 10F
提高tween 20和TBS的濃度也可以試試
07/04 01:22, 10F
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