[討論] 塗plate時勝任細胞加的量

看板Biotech作者 (AusPiCious)時間17年前 (2008/07/01 19:46), 編輯推噓6(6推 0噓 2→)
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請問各位大大 就是transformation後 要把轉入plasmid後的E.coli塗到plate上 可是我一直都不知道要加多少量的勝任細胞到plate上耶 我之前是全加 可是這樣會不會加太多了? 小弟是新手 請各位多多指教^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.127.215.11
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07/01 19:49, , 1F
我是都spin down之後resuspend，通通丟下去(約150uL)
07/01 19:49, 1F
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07/01 20:11, , 2F
以前用買來的勝任細胞 transform purified plasmid DNA
07/01 20:11, 2F
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07/01 20:13, , 3F
total 100ul 加 3-5ul 就長很多了
07/01 20:13, 3F
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07/01 20:38, , 4F
100~200ul差不多了~你那樣加有1cc吧= =
07/01 20:38, 4F
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07/01 20:57, , 5F
如果是做ligation的，spin down全下，丟質體的10％就夠了
07/01 20:57, 5F
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07/01 22:31, , 6F
建議先了解勝任細胞的轉型效率 避免效率太好挑不到單一菌落
07/01 22:31, 6F
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07/02 10:26, , 7F
考慮到效益跟密度,不要塗一盤都沒有,或是密密麻麻挑不出來
07/02 10:26, 7F
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07/02 10:27, , 8F
使用購買的plasmid或是compentent cell kit會寫要加多少
07/02 10:27, 8F
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文章代碼(AID): #18QXa54e (Biotech)