[求救] caspase 3的Western blot

看板Biotech作者 (研ㄧ)時間16年前 (2008/06/21 19:01), 編輯推噓3(3推 0噓 7→)
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我們實驗室是做敗血症研究 有很多paper說敗血症晚期的時候體內會有大量廣泛的apoptosis 尤其在免疫細胞上 造成免疫力下降而被病原感染造成死亡 我現在使用一個藥物能抑制apoptosis 希望可以改善敗血症的存活 使用動物：大鼠 要看的tissue：肺、肝、脾＆腎 判斷apoptosis的程度：cleaved caspase 3 問題：Western blot壓出來band很清楚(Cell Signaling,一抗1:1000,二抗1:1500) 但是連sham組（假手術）都有，而且許多甚至比引發敗血症手術的組別還要濃 （這個抗體可以壓出兩個cleaved form：17 & 19 KDa，看產品protocol 17 KDa 比較specific for apoptosis） 廠商說可能是我製備sample的時候用sonification homogenize造成的，但每一組 都有homogenize啊 請問各位可能是什麼原因呢？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.90.35
推
06/27 11:24, , 1F
之前已經有paper確定敗血症引發的apoptosis是因caspase3
06/27 11:24, 1F
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06/27 11:25, , 2F
嗎?何不先確定真的有apoptosis的現象差異再看caspase3
06/27 11:25, 2F
推
06/27 11:29, , 3F
何不試試看其他的 ex:DNA fragmentation
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06/27 11:31, , 4F
要不做切片染annexin 也很 ok
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06/27 19:03, , 5F
apotosis 一定會經過caspase 3的活化，另外口試在即
06/27 19:03, 5F
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06/27 19:04, , 6F
也來不及做其他的了，不過還是謝謝您的回答！
06/27 19:04, 6F
推
06/27 23:55, , 7F
apoptosis有caspase dependent or independent
06/27 23:55, 7F
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06/27 23:57, , 8F
因為你是組織的wb 所以建議你可以放positive control
06/27 23:57, 8F
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06/27 23:59, , 9F
若真的是caspase3 或許是因為你組織蛋白太濃而有這樣的
06/27 23:59, 9F
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06/28 00:00, , 10F
結果~或許減少蛋白量就有差異了~祝你口試順利囉
06/28 00:00, 10F
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