[討論] enhancer接到 pGL3-basic vector
我在研究基因的轉錄調控
目前在transcriptional start site 上游約8.5K的地方
預測到一個 transcriptional factor 結合位置
已經用EMSA證明該序列會結合該factor(有super shift)
由於該序列為位在上游8.5k
因此要做reporter assay時 參照paper作法 會把該序列clone出來
當成enhancer來處理 clone到promoter之前或後
我是把該序列 約300bp 用PCR amplify 接到該gene之 minimal promoter之前
(pGL3-basic + minimal promoter + 300bp element)
但是 實驗結果 並沒有看到有作用
找了口試委員討論 他要我直接把300bp clone到pGL3-basic上
這讓我很困惑 pGL3-basic上面沒有 promoter 也沒有任何RNA polymerase
可以接合的序列
我的300bp序列中 也不含TATA or CCAAT box
這樣的luciferase costruct cotrasfected with/without receptor expresion plasmid
會看到作用嗎?
我把我的疑惑告訴老師 為什麼不是接到pGL3-promoter vector
而是pGL3-basic vector
他說 basic還是有很基本的活性，pGL3-promoter vector怕太強
induce之後可能也看不到)
想請教大家意見
因為我問到的人以及文獻都沒把enhancer直接clone到basic的
謝謝
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im a good student
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