[求救] 這樣的結果還能繼續往下做嗎??

看板Biotech作者 (尋找)時間16年前 (2008/05/29 00:11), 編輯推噓6(6推 0噓 6→)
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前不久有PO版 也有一些網友給了我建議 像是check產的protein有沒有毒性 但沒有paper有提到 而且其實這個protein先前就有paper induction成功 只是我的實驗 選用的vector不同 但都是pET系列的 可是怎麼做都遇到問題 問題如下: 實驗try了三種菌去做induction BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysE SDS-PAGE始終都無法看出明顯很粗induction的BAND 甚至連空的菌(沒有transform的)都在差不多的位置有看到BAND 根本無法看出空的菌、沒有induction、跟有induction的差異(因為在那位置上 都有BAND) 後來壓WB 空的就沒有BAND 而沒有induction跟有induction都有明顯的band 但兩者看不出差異 好像根本就是不用加IPTG 就可以跟有加IPTG的結果一樣 圖檔如下 預期的size為47 kDa http://www.wretch.cc/album/show.php?i=shuo218&b=3&f=1786188116&p=0 C:control 空的菌(沒有送入plasmid) N-1、N-2:沒有induction 其餘為不同濃度的IPTG(0.5mM、1mM、2mM) 37度C 三小時 上面的結果必須要WB的情況才看的到 SDS-PAGE無法區別(因為連空的都有BAND) 那可以繼續往下做purify嗎? 還是應該在修正其他condition嗎? 因為已經做到鬼打牆的地步 想尋求大家的幫忙 大家覺得可以繼續往下做嗎? 之後purify的protein會用來打兔子產Ab 還有treat 細胞 已經卡在induction很久一段時間了 再沒結果大概就要換題目了 可是又不想放掉 想請大家幫幫忙 是否有什麼地方應該修正的 小弟在此先深深地鞠躬感激 謝謝了!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.129.77.129
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protein是soluble form就有做的價值！
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不是inclusion body就該謝天謝地了
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量少大不了養多一點
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量很少耶 就算養幾百c.c來純化也purity也不會高
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這樣打兔子出來抗體也不一定能用喔
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你沒有純化耶 有純化的話濃度會高很多才對
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我覺得有東西…所以是我的話會純化看看有多少
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有時候PAGE是不太好用的，always case by case
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我覺得溫度可以降到室溫overnight做做看~對有些protein有效
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推
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我的SDS-PAGE狀況還比你糟，可是產率也還有10~ 25 mg.
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以上per liter. So, because you have tried, why not purify
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謝謝大家給我的建議 我會往下試試看的 謝謝!!
05/30 11:15, 12F
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