clone很多次都沒有成功---求救

看板Biotech作者 (Dear John letter)時間17年前 (2008/05/11 22:37), 編輯推噓4(4推 0噓 2→)
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最近在cloning 作了很多次都沒有成功 我的vector size 是9kb insert size 是300bp RE 是用 BsiwI 和 DraIII 試了好幾次 就是沒有成功 想請問一下 各位大大 有什麼建議 感謝 我的比例1:3 1:5 都用過了 -- 如果愛情像一部電影 你會選擇看清楚沿途的風景 還是有一個你所想要的ending... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.112.169.238
推
05/11 23:58, , 1F
大小差距蠻懸殊 確定Enzyme都有切動 insert用到10看看
05/11 23:58, 1F
推
05/12 00:59, , 2F
如果都有切動，有時候可能是ligation失敗吧
05/12 00:59, 2F
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05/12 00:59, , 3F
確認看看ligase和ligase buffer有沒有問題
05/12 00:59, 3F
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05/12 22:46, , 4F
ATP 也很重要唷
05/12 22:46, 4F
推
05/13 11:36, , 5F
DNA total < 30 ng 有時候放太多去接反而接不動
05/13 11:36, 5F
推
05/17 05:06, , 6F
1:15或1:20試試，我的I:V=150b:9K用這比例有成功
05/17 05:06, 6F
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