[求救] 限制酶截切沒有band

看板Biotech作者 (新的開始~加油吧)時間17年前 (2008/05/09 22:57), 編輯推噓4(4推 0噓 7→)
留言11則, 5人參與, 最新討論串1/1
想請教各位 我把欲cloned的基因和pET21a進行ligation 隔天挑點作colony PCR 有出現目標band 再將那些點養菌抽質體 可是之後進行限制酶作用 卻都沒有出現我要的band 做了三次都出現這個問題 不知道該怎麼辦 0rz 請教各位了 謝謝回答 <(_ _)> -- 不要小看自己 因人有無限可能 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.234.138
推
05/09 23:31, , 1F
可以試看看直接取colony做PCR看P不P得出來
05/09 23:31, 1F
推
05/09 23:39, , 2F
拿酵素去切其他DNA 看能不能切
05/09 23:39, 2F
推
05/10 22:20, , 3F
樓上 應該是要測試你的enzyme有沒有壞掉 right?
05/10 22:20, 3F
推
05/11 01:34, , 4F
如果enzyme沒壞，可是又切不出來...會不會其實你P出來不是
05/11 01:34, 4F
→
05/11 01:34, , 5F
你想的目標基因....只是恰巧被你的primer P到而已....
05/11 01:34, 5F
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05/14 17:05, , 6F
有查NEB看你的限制酶有無特殊note?
05/14 17:05, 6F
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05/14 17:05, , 7F
之前我有切不動的情形是因為plasmidDNA在細菌中太舊才抽出
05/14 17:05, 7F
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05/14 17:06, , 8F
導致可能被甲基化，所以切不動，再把DNA重新transform重抽
05/14 17:06, 8F
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05/14 17:06, , 9F
就不會了
05/14 17:06, 9F
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05/14 17:07, , 10F
久 (錯字)
05/14 17:07, 10F
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05/14 17:09, , 11F
注: 太久= transform菌養2ml離心後直接凍-20超過一個月後抽
05/14 17:09, 11F
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