[求救] Southern 背景值過深

看板Biotech作者 (天使光)時間16年前 (2008/05/03 15:42), 編輯推噓4(4推 0噓 4→)
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最近很常問Southern的問題 因為實在有點走投無路了TT 之前好不容易有做出Southern 但最近又要做另外一批的數據 用的buffer都跟以前一樣 只是溫度改成65度 之前是用55度 因為片段的相似性比較低 可是這次做出來的結果都很奇怪 背景值很深 Sample的區域反白 我們家用的CDP-star是NEB的 之前用的酵素太久 所以買新的 可是我同學用了都有做出來 除此之外沒有改變其他東西 但是壓片半小時之後出來的都是黑呼呼的一片 我洗片的時間已經比protocol上所標示的時間延長了 實在想不出來是為了什麼原因 請板上的大大幫忙 非常的感謝 -- 在大海中泅泳的魚 你會不會也想要像飛鳥一樣翱翔 還是心甘情願的待在你的 水藍色天堂 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.196.22
推
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wash時的溫度呢？？ 我通常都用0.5XSSC在68度wash兩次
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05/03 19:23, , 2F
背景超乾淨....不過我是用NBT/BCIP來顯色啦，不是用壓片
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推
05/03 20:48, , 3F
貼圖上來大家瞧瞧吧.....
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05/04 10:34, , 4F
我也有用0.5X SSC在65度wash兩次 但還是一樣的髒 TT
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推
05/05 15:15, , 5F
可以改probe的序列嗎？ 另外請問blocking buffer
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05/05 15:34, , 6F
因為我是要針對我的INSER去做HYBRIDIZATION 所以應該無
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法更改probe，Blocking solution處有什麼問題嗎
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推
05/06 12:46, , 8F
以前blocking含有ssDNA 溫度用37度1hr，蠻乾淨的
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