[求救] 關於western blotting時觀測phospho protein的問題

看板Biotech作者 (逃避不是辦法阿)時間18年前 (2008/04/20 02:26), 編輯推噓3(3推 0噓 5→)
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前面看到有板有在推文中提到 western要辨認磷酸化蛋白質時 比較不建議用脫脂牛奶blocking 建議用BSA blocking 剛好最近我也在看不同的磷酸化蛋白質 其中我觀察的p-JNK訊號非常弱 雖然我要比較的差異一直存在 但是整體而言訊號弱到我需要一抗二抗濃度加強 二抗作用時間也需要加長 這樣的現象會是因為我用脫脂牛奶blocking有關嗎? 我若改用BSA blocking會改善嗎? 另外,使用的BSA是用哪種溶劑泡呢(1X TBS? TBST?) 謝謝^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.165.87.227
推
04/20 09:54, , 1F
我用過的都建議TBST 還有用BSA blocking時間要加長
04/20 09:54, 1F
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04/20 09:56, , 2F
加長是因為BSA貼附能力沒牛奶好(trouble shooting寫)
04/20 09:56, 2F
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04/20 09:57, , 3F
實際上嘗試過RT 1hr.2hr.3hr 4度O/N...RT2hr後效果
04/20 09:57, 3F
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04/20 09:58, , 4F
看起來都一樣　(不過這也要看你Ab去抓條件￣▽￣||)
04/20 09:58, 4F
推
04/22 08:51, , 5F
我用過invitrogen的phosphoprotein staining染這些BSA,更是
04/22 08:51, 5F
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04/22 08:54, , 6F
充滿磷酸化,所以casein被磷酸化而不適用的理由不見的成立
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04/22 08:57, , 7F
我覺得用改變non-fat的condition比換BSA來得有效
04/22 08:57, 7F
推
04/22 16:11, , 8F
my sugestion is TBS-T 0.1%
04/22 16:11, 8F
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