[討論] blunt-end ligation

看板Biotech作者 (史信)時間18年前 (2008/03/26 23:37), 編輯推噓6(6推 0噓 2→)
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請問一下 PFU做出的PCR product 可以直接拿來做blunt-end ligation嗎? 還有blunt-end ligation有啥需特別注意的地方? 真難做... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.118.230.16
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03/26 23:48, , 1F
雖然理論上可行,但是vector在CIP之後實際上是沒辦法成功的
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除非5端加P,或者vector不要CIP但這成功率比發票難中更多
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03/26 23:57, , 3F
我vector有用CIP 接不起來..之後打算用taq做PCR來接看看
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絕對可以，我用過Pfu和EcoRV切一刀的vector接，做成不下十次
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從0.4~12kb的片段都有塞進2.1kb載體的記錄過(搭配藍白)
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一般的primer的5端沒有P,如果vector又CIP去P,沒磷酸怎麼接?
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那我怎麼接出來的@@ (不然就不要CIP好了)
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03/28 17:56, , 8F
PCR產物還要用T4 PNK加上P才能接進去吧
03/28 17:56, 8F
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